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    1.柳州市工人医院风湿免疫科，广西柳州 545005；2.柳州市工人医院呼吸与危重症医学科，广西柳州 545005；3.柳州市工人医院病理科，广西柳州 545005

    硬皮病(scleroderma，SD)是一类以小血管病变、免疫异常及皮肤增厚和纤维化为主要特点的自身免疫性疾病，病因及发病机制十分复杂，目前尚未完全清楚，治疗较困难[1]。吡非尼酮(pirfenidone，PFD)具有抗炎、抗氧化作用和抑制胶原的合成，甚至能够逆转纤维化和瘢痕的形成，这在大量的动物和体外实验中被证实[2-3]。PFD能够减少肺、肾等器官成纤维细胞结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)的表达，并与胶原的合成和基质的减少呈相关性[4-5]。PFD作用于皮肤纤维化的机制如何，国内的报道较少。基于此，本研究通过检测给予PFD干预SD小鼠模型后皮肤CTGF和ColV含量的变化，为临床PFD防治皮肤纤维化提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    从湖南斯莱克景达实验动物有限公司购买SPF级6～8周龄雌性BALB/c小鼠，共24只，体重(25±2)g，许可证号：SCXK(湘)2016-0002。在通风采光正常的环境中饲养1周后开始实验。

    1.2 方法

    1.2.1 主要试剂 博来霉素(Bleomycin，BLM)A(H20055883)和吡非尼酮胶囊(H20133376)分别购自浙江海正药业股份有限公司和北京康蒂尼药业有限公司。磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution，PBS)购自福州迈新生物技术开发有限公司，苏木素染液、1%伊红染液、Msson复合染色液均购自珠海贝索生物技术有限公司。羟脯氨酸试剂盒购自南京建成生物工程研究所；多克隆抗体兔抗鼠CTGF抗体为武汉博士德生物工程有限公司产品；多克隆抗体兔抗鼠ColV抗体为北京博奥森生物技术有限公司产品；SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

    1.2.2 主要仪器 酶标仪为赛默飞世尔科技(中国)有限公司提供，病理图像分析系统为上海普赫科技有限公司的产品，细胞免疫组织化学定量分析系统由上海申腾信息技术有限公司提供。

    1.2.3 实验分组 实验前剃去小鼠背部中央区被毛，雌性BALB/c小鼠随机分为四组，分别为对照组(6只)、BLM组(6只)、PFD干预组(6只)和BLM+PFD干预组(6只) ......