杨振伟 蒋静涵 谢东辉

    皖南医学院第一附属医院急诊科，安徽芜湖 241000

    心房颤动(atrial fibrillation，AF)又称房颤，是 临床常见的心律失常之一，现在已经成为心血管疾病中的一大流行性疾病，严重影响患者的预后及生活质量[1-2]。随着对AF机制研究的不断深入，研究者发现心房结构重塑在房颤病理性进程中发挥着重要作用，而心房纤维化则是心房结构重塑的基础[3-4]。纤维化进展的关键在于细胞外基质在组织间隙的沉积，细胞外基质主要包括胶原蛋白(Ⅰ型及Ⅲ型)、细胞纤连蛋白和基底膜蛋白如层黏连蛋白等。研究表明成纤维细胞在纤维化进展中起着重要作用，通过增殖、迁移及调节细胞外基质(ECM)的代谢，参与调节纤维化。并可转化为肌成纤维细胞，更有效地合成细胞外基质，肌成纤维细胞可表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)促进心脏纤维化[5]。大量研究表明，RAS系统的激活在心房纤维化发生发展中发挥着重要作用，当RAS系统被激活后主要活性效应分子是AngⅡ[6-7]，AngⅡ通过与细胞G蛋白偶联的AngⅡ的Ⅰ型受体(AT1R)相结合，激活主要激活丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)信号通路促进纤维化进程[8]。相关C3肉毒梭菌毒素1(Rac1)，是小三磷酸鸟苷酶结合蛋白，属于Ras超家族中Rho亚家族的成员。既往研究发现Rac1在心房纤维化过程中发挥重要作用[9]。Liu等[10]发现，AngⅡ可以激活Rac1，且活化型Rac1的表达水平的升高可促进心房纤维化。Rac1-V12是Rac1的人工突变体，具有持久性生物活性，可模拟病理状态下活化型Rac1[11]，纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor，Fgf)是一组多肽形成纤维细胞的有丝分裂原，具有促进血管、骨形成和损伤修复的功能[12]。最近发现Fgf家族在调节心脏功能中的作用，其中Fgf21、Fgf23与房颤发生发展呈正相关，具有促进心房纤维化的作用[13-14]，Fgf13是啮齿动物心脏中最主要的纤维细胞生长因子，也是人类心脏中常见的转录本，参与调节心脏的电压门控Na+离子通道[15-16]，近期发现Fgf13在心脏肥厚的调节中发挥重要作用[17]。而其在心房纤维化方面尚无相关研究。本研究将初步探索Fgf13在AngⅡ激活小G蛋白Rac1促进心脏成纤维细胞增殖、迁移过程中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    胎牛血清、DMEM培养基、0.25%EDTA-胰蛋白酶(美国Gibco公司)，Ⅱ型胶原酶购于美国Worthington Biochemical公司；Ad-Vector、Ad-Rac1、Ad-Rac1-V12等腺病毒表达载体购自中国山东维真生物科技有限公司；血管紧张素Ⅱ(美国 Sigma-Aldrich 公司)；GAPDH兔多克隆抗体、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)兔多克隆抗体、α-SMA鼠多克隆抗体、Rac1兔多克隆抗体、Fgf13兔多克隆抗体购自ABclonal公司；山羊抗兔二抗、SDS-PAGE凝胶试剂盒、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液购自中国碧云天公司；PVDF膜和ECL发光液中国碧云天公司细胞培养箱购自美国Thermo公司 ......