闫 冰 薛丽丽 关丽梅 张炳煌 骆献阳▲

    1.厦门大学附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科，福建厦门 361003；2.厦门大学医学院，福建厦门 361003；3.厦门市耳鼻咽喉头颈外科重点实验室，福建厦门 361003；4.厦门大学附属第一医院口腔科，福建厦门 361003

    口腔癌是头颈部常见恶性肿瘤，发病率逐年升高，在全身恶性肿瘤发病率排名第十二名，而在发展中国家发病率排名第八名。在我国，口腔癌发病率也呈逐年升高的趋势[1-3]。口腔癌的病理类型主要是口腔黏膜鳞状细胞癌，虽然随着科技进步，口腔癌的治疗方法及药物不断更新，但其预后依然较差，5 年存活率仅为50%～60%[3]。早期诊断、早期治疗依然是改善口腔癌患者预后的最有效方法，其中治疗方式以外科手术切除肿瘤及颈部淋巴结为主，术中手术切缘是否有肿瘤残留对患者的预后至关重要。

    表面增强拉曼光谱技术(surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS)基于电磁场增强和电荷转移增强的拉曼光谱新技术，其原理是将纳米级探针加入在待测样本中进行混合，纳米探针在待测样本表面近距离接触时可以增强局域电磁场，提高了待测样本分子拉曼散射的概率，从而指数级地提高待测样本拉曼信号强度[4-5]。SERS 具有快速、便捷、无创检测等优势，检测灵敏度高，单个分子样本也可被检测，已广泛应用于生物医学领域的研究，如疾病检测及诊断[6]。

    研究表明，口腔黏膜癌前病变时期表皮生长因子受体(epidermal growth factor recptor， EGFR)表达即开始增强，EGFR 主要在上皮细胞表达，在癌变过程中鳞状上皮细胞EGFR 表达水平不断增高[7-8]。因此，本研究构建一种EGFR 抗体修饰的纳米探针并将其应用于口腔鳞状细胞癌SERS 的检测研究中。

    1 材料和方法

    1.1 EGFR抗体修饰的纳米探针制备

    在容量瓶中配置100mL 1.0×10-4g/mL 氯金酸水溶液，加入至250mL 圆底烧瓶中。在快速搅拌下将溶液加热至沸腾，迅速一次性加入0.95mL 1.0×10-2g/mL 的柠檬酸钠水溶液，继续搅拌沸腾30min 后冷却。然后取该溶液10mL，缓慢滴加100μL 0.1mM的4-巯基苯甲酸(4-mercaptobenzoic acid， 4-MBA)溶液并不断搅拌，充分搅拌混合30min 后静置过夜，再以6000r/min 离心10min，去除上清液，去离子水重悬即可使用。取上述10mL Au-MBA 粒子 ......