α干扰素增强顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡
细胞周期,1材料与方法,1细胞培养与试剂,2MTT法检测细胞活力,3流式细胞术,4Hoechst33258荧光染色,5RT-PCR,6Westernblot,7统计学处理,2结果,1IFN-α在U2OS细胞而非MG63细胞
黄秀芳 原向伟 秦 英 向珊珊 陈忠羡1.中山大学附属江门医院 广东省江门市中心医院病理科,广东江门 529030;2.中山大学附属江门医院 广东省江门市中心医院脊柱骨科,广东江门529030
在骨组织原发恶性肿瘤中,骨肉瘤发病率最高,常早期出现肺部转移,预后不良。术前术后新辅助化疗联合外科手术是骨肉瘤的主要治疗方式,但常因为耐药或毒副作用导致化疗失败,从而使患者丧失手术机会或肿瘤复发,甚至丧失生命[1]。干扰素作为生物治疗方式之一,已被用于多种恶性肿瘤的治疗,还可与传统化疗药物协同治疗恶性肿瘤,增强化疗敏感性[2],但相关研究在骨肉瘤罕见报道,因此本文设计α干扰素(interferon-α,IFN-α)与顺铂(cisplatin)联合处理骨肉瘤细胞U2OS(p53正常)和MG63(p53突变),观察其抗肿瘤效应,并分析其分子机制,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 细胞培养与试剂
骨肉瘤细胞U2OS(p53基因正常,ARF基因启动子甲基化[3])和MG63(p53基因突变,ARF基因纯合缺失[3])来自中山大学病理教研室,培养液为含10%胎牛血清、100 μg/ml链霉素和100 U/ml青霉素的DMEM,5%CO2培养箱37℃培养。Opti-MEM、Lipofectamine 2000、TRIzol购于Invitrogen公司。dNTP、Taq酶等PCR试剂购自上海申能博采,RNASIN、M-MLV为Promega产 品。IFN-α为Peprotech产品(300-02AB),顺铂(479306-1G)、MTT、碘化丙啶(PI)均为Sigma产品,本研究全部抗体均来自Santa Cruz。
1.2 MTT法检测细胞活力
96孔板加顺铂 ......
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