磁珠法与分离法在人乳头瘤病毒基因分型检测中的比较
核酸,1资料与方法,1一般资料,2仪器与试剂,3检测方法,4统计学分析,2结果,1两种核酸提取方法的结果比较,2准确度比较,3DNA浓度与A260,A280比值比较,3讨论
刘 琪 陈晓佳 方炳雄 洪妙玲 庄蓓丽广东省普宁市人民医院精准医学中心,广东普宁 515300
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种球形无包膜环状双链DNA病毒,主要通过性传播感染人皮肤和黏膜上皮。宫颈癌是目前女性最常见的生殖道恶性肿瘤,极大地威胁着女性的生命和生殖健康,HPV持续感染是宫颈癌发病的主要原因[1]。当前随着磁珠法在病毒核酸检测中的普及应用,全自动核酸提取仪利用磁珠法提取核酸,提高了核酸的提取效率,降低了人工操作误差,实现了病毒核酸的高灵敏与高通量检测[2-4]。但是在新试剂和新仪器应用前,需进行相关性能验证。D'Souza等[5]也指出前处理方法的不同也会影响HPV的分型结果。因此本研究通过比较磁珠法与传统手工法(分离法)两种提取核酸的方法在HPV分型结果的一致性,利用室间质评来评价准确度,比较两种提取方法的DNA浓度与A260/A280比值,从这三个方面来评价全自动核酸提取仪在HPV分型检测中的应用,为实验室实现HPV全自动核酸提取提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集普宁市人民医院门诊妇产科和性病科2020年12月至2021年1月114份女性宫颈脱落细胞标本和21份男性下生殖道分泌物标本。纳入标准:适合用阴道张开器暴露宫颈取材,错开月经期的成年女性;取材顺利的成年男性;愿意参与本实验室研究,临床资料完整的患者。排除标准:严重疾病;行宫颈切除术后的女性患者;不能完成本研究全过程的患者。
1.2 仪器与试剂
磁珠法的提取试剂、分离法的提取试剂、HPV核酸扩增试剂、HPV杂交检测试剂盒以及宫颈脱落细胞保存液均来自潮州凯普生物化学有限公司。仪器主要有全自动核酸提取仪(潮州凯普生物化学有限公司HBNP-4801A)、超微量分光光度计(赛默飞NanoDrop2000)、PCR扩 增 仪(东 胜ETC811)、AutoMax全自动核酸分子杂交仪(潮州凯普生物化学有限公司HBHM-900A)、干式恒温器(杭州奥盛仪器有限公司)等。
1.3 检测方法
1.3.1 样本采集 所有标本采集均经过医生征得患者知情同意。女性宫颈脱落细胞由医生以阴道张开器暴露宫颈,在宫颈口轻轻搓动,宫颈刷使其顺时针旋转几周,确保取得足够量的脱落细胞 ......
您现在查看是摘要页,全文长 9205 字符。