刘 韵 叶 钧

    1.陆军军医大学第一附属医院消化内科，重庆 400038；2.陆军第九五八医院消化科，重庆 400020

    黏蛋白O-型糖链根据在丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)分子上不同连接，可分为Core 1～8八种不同O-型糖链[1]。不同类型的O-型糖链由不同的糖基转移酶催化合成，Core 3 O-型糖链由β-1，3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶6(β3gnT6)催化合成。肠致病性大肠杆菌(EPEC)和肠出血性大肠杆菌(EHEC O157∶H7)可引起患者从轻度腹泻到严重疾病的发生，如出血性肠炎[2]；O-型糖链可能与肠道共生菌群的选择相关，同时可以作为不同细菌的黏附位点[3]。本课题组前期研究发现，苯甲基-α-N-乙酰半乳糖胺(benzyl-α-GalNAc)抑制肠上皮细胞O-型糖链的合成，将导致细菌黏附于肠上皮细胞细菌数减少，同时侵袭入细胞内细菌数增加。因benzyl-α-GalNA抑制的是肠上皮细胞所有O-型糖链的合成，不能鉴别出是哪种O-型糖链在细菌的黏附和侵袭过程中发挥作用，本研究通过构建Core 3 O-型糖链过表达结肠上皮细胞株来探讨Core 3 O-型糖链对细菌黏附和侵袭肠上皮细胞的影响。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与材料

    人类结肠癌细胞系HT-29(T25-flask，货号CBP60011)和LS174T(T25-flask，货号CBP60033)购买于上海中科院细胞库。EPEC、EHEC O157∶H7、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)来自陆军军医大学微生物教研室。β3gnT6过表达慢病毒(1 ml，滴度为108，货号L2016-745SH)由上海吉玛公司合成，庆大霉素注射液购买于西南药业有限公司(2 ml∶80 000单位，国药准字H50021451)，TEER测定细胞培养板(12孔，货号3422)购买于美国Costar公司，碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)染色液(1 ml，货号S7109)购买于美国Sigma公司，McCoy’s 5A培养基(500 ml，货号M9309)购买于美国Sigma公司 ......