李 戈 姚梦玮 李玉迁 李 胜 方小涵 魏 洪▲

    1.贵州医科大学基础医学院 微生物学教研室 感染与免疫学实验室，贵州 贵阳 550000；

    2.贵州医科大学临床医学院，贵州 贵阳 550000

    结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是最常见的消化系统肿瘤之一，全球肿瘤发病率位居第三位[1]，多数结直肠癌患者确诊时已进入中晚期进而发生结直肠癌的转移和侵袭[2]。目前结直肠癌的治疗手段主要是手术切除、放疗和化疗[3]，虽然不断有新的治疗方案[4]，但其远期生存率仍较低。因此，迫切需要新的方式来治疗结直肠癌转移和侵袭。水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV)能够选择性杀灭肿瘤细胞，但不影响正常细胞，是一种很有前途的治疗癌症的新型溶瘤病毒[5]。VSV 可治疗小鼠结直肠癌转移[6]和抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移[7]。国内外少有报道VSV 对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响及机制。因此，本研究探讨VSV 对结肠癌SW480 细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并探究其可能作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器

    人结肠癌细胞株SW480、绿猴肾上皮细胞Vero、VSV(贵州医科大学基础医学院感染与免疫学教研室)；抗MMP-2 抗体(Proteintech 公司)；抗MMP-9 抗体(SAB 公司)；抗GAPDH 抗体(Abcam公司)；二抗(兔抗，普美生物公司)；二甲基亚砜、胎牛血清(四季青公司)；高糖DMEM、青霉素链霉素、胰蛋白酶EDTA(美国Gibco 公司)；PCR 荧光定量试剂盒、逆转录试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)；CCK-8 试剂盒(同仁化学研究所)；Tanswell 小室、Matrigel 基质胶(美国Corning 公司)；4℃台式离心机(丹麦LaboGene 公司)；酶标仪(美国BioTek 公司)；倒置显微镜、Real time PCR 仪、多功能凝胶成像系统(美国Bio-Rad 公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 细胞在含有10%胎牛血清、10×青链霉素的DMEM 培养基中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养。

    1.2.2 实验分组 细胞增殖实验按照VSV 浓度(MOI=0.01、0.1、1、10、100) 和 时 间(24、48 h)设置分组；其余实验分为3 组 ......