孙雷涛 刘立云 张文生

    滨州医学院附属医院神经外科，山东滨州 256600

    胶质母细胞瘤(glioblastoma，GBM)是临床最常见的中枢神经系统恶性肿瘤，具有高复发率、高增殖率及局部复发侵袭等特点。目前胶质母细胞瘤的治疗原则为在尽可能保留神经功能的基础上全切肿瘤，术后辅以放化疗等综合治疗[1]。然而由于血脑屏障和血瘤屏障的存在，化疗药物选择性低、渗透能力弱、入胞效率低及耐药性等限制了化疗效果。外泌体(exosomes)作为新型的药物携载体，体积小、易通过血脑屏障，同时还能进行膜修饰从而增强细胞特异性靶向作用。在免疫反应、安全性上有很大的优势[2]。本研究运用体外修饰的外泌体作为阿霉素的载体，通过靶向修饰携载化疗药物快速、高效、靶向地输送至胶质瘤细胞，增强细胞亲和力，减少非靶部位的聚集，抑制胶质瘤细胞的体外增殖。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    U87MG 细胞系(中科院上海细胞生物学研究所)；转染试剂(美国Invitrogene 公司)，引物由上海生工设计合成，阿霉素(美国Sigma 公司)，荧光染剂PKH67(美国Invitrogen 公司)，电穿孔仪(美国Invitrogen 公司)，激光共聚焦显微镜(德国蔡司公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 凯基DMEM 完全培养基用于细胞培养，待U87MG 细胞融合程度达到85%～90%时进行细胞的传代培养，收集第6～8 代的细胞用于后续的实验。培养条件为37℃、5% CO2。

    1.2.2 具有靶向作用外泌体的表达载体pCDNA3.1/LAMP2-Flag-iRGD 的 构 建 以LAMP2 cDNA为模板设计引物：LAMP2 Xhol 上游引物序列：TCTCGAGATGGTGGTGTGCTTCCGCCT，LAMP2 Xhol下游引物序列：AACTAGTAAATTGCTCATATCCAGC ......