王海娟 薛利宁 余韶华 季小诗 闵 微 王秀利 林长青

    北京热景生物技术股份有限公司参考溯源实验室，北京 102600

    睾酮是调节性分化、促进第一和次性特征的关键男性激素。低睾酮水平与胰岛素抵抗有关，会提高患糖尿病和代谢综合征的风险[1-2]。睾酮缺乏也与慢性疾病有关，如心血管疾病和骨质疏松症[3]。免疫测定法常用于测定人血清中睾酮的水平。大多数免疫分析方法的准确性不够，尤其是针对女性睾酮浓度低和男性雄激素缺乏症的情况[4]。因此，建立血清睾酮检测的参考方法是实现其结果准确可比的前提。同位素稀释液相色谱串联质谱(isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry，ID LC-MS/MS)法已被广泛应用于建立有机生物标志物具有计量溯源性的参考测量程序。它通过选择性反应监测具有准确识别和测量分析物、灵敏度高、特异性高的特点，被认为是一种基准法，具有最高的计量质量，描述详细且易于理解的操作方法，以及完整的不确定度说明[5-6]。经调研，目前国际医学检验溯源联合委员会(Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine，JCTLM)列表里的睾酮参考方法主要有两类，一类是利用气相色谱串联质谱的参考方法，如比利时根特大学[7]、德国临床化学和检验医学学会[8]的方法；另一类为利用液相色谱串联质谱的参考方法，如新加坡卫生科学局(Health Sciences Authority，HSA)[9]、美国疾病预防控制中心(Center for Disease Control and Prevention，CDC)[10]、美国国家标准和技术研究院(National Institute of Standards and Technology，NIST)[11]的方法。其中气相色谱串联质谱参考方法涉及睾酮的衍生化，美国CDC及NIST的参考方法也需要固相萃取或多步液液萃取，操作繁琐，耗时较长。新加坡HSA的方法前处理相对简单，不涉及衍生化，使用一步法液液萃取。但北京热景生物技术股份有限公司参考溯源实验室(本实验室)运行该方法后发现色谱流动相梯度为等度洗脱，样本分离效果不好，精密度较差。本实验室在HSA的参考方法基础上进一步改良 ......