蒋邱逃 孙华杰

    (1四川省成都市武侯区疾病预防控制中心 四川 成都 610041)(2深圳市龙华区疾病预防控制中心 广东 深圳 518000)

    1.前言

    传统PCR需要分离染色，定量不准，因此在退火、延伸过程中对核酸中EB含量进行检测，从而对目标基因精确定量。此方法为非特异性的，仅能反映核酸总量。于是在接下来的几年中，研发出了实时荧光定量PCR技术，比原技术有了质的飞跃，使得DNA定量更高效，分析更准确，灵敏性更高。

    因此对诺如病毒进行相应的检测尤为必要，主要检测方式有逆转录-聚合酶链反应(即RT-PCR)以及酶联免疫吸附实验(即ELISA)。又因为该病毒不能体外培养，相关动物模型匮乏，变异型较多，为检测增加了难度。

    2.实验方法

    2.1 材料与方法

    2.1.1 样品采集 191份粪便样本采集自山东省青岛市(可改)，临床病例表现为腹泻、腹痛、呕吐, 部分患者出现寒战、发热。样品用PBS配制成20%粪便悬液，保存于-80℃。

    2.1.2 试剂仪器 TIANamp Virus RNA Kit购自TIANGEN公司，PrimeScript RT Reagent Kit购自TaKaRa公司。

    2.2 引物与探针

    引物及探针设计如表1所示，由上海生工生物有限公司合成。

    表1 引物探针及序列

    2.3 RNA提取

    按照TIANamp Virus RNA Kit提取试剂盒步骤进行 ......