祝行琴

    (浙江大学医学院附属第二医院 浙江 杭州 310008)

    肺癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，大多患者确诊时已属晚期，丧失了手术治疗的机会，因此放化疗和靶向治疗是晚期非小细胞肺癌治疗的主要方式。EML4-ALK基因重排是非小细胞肺癌靶向治疗的有效靶点之一，约5%患者携带有EML4-ALK基因重排，特别是非吸烟患者，突变率可达17%，该类患者可以从靶向ALK激酶的酪氨酸激酶抑制剂中获益[1,2]。目前，常规的EML4-ALK基因重排的检测方法是基于组织标本的免疫组化法、荧光原位杂交法、rt-PCR法以及高通量测序法[3,4]。然而存在部分晚期非小细胞肺癌患者无法进行组织活检，因此基于血液标本的液体活检技术给这类患者带来了新的希望，但血液ALK重排检测相对于EGFR基因检测难度更大。下文对现阶段血液ALK基因重排的检测技术进行综述，以促进晚期NSCLC患者ALK重排检测的普及。

    1.循环肿瘤细胞技术检测ALK基因重排

    近年来，研究表明循环肿瘤细胞也能用于EML4-ALK重排检测，并且多个研究结果显示，循环肿瘤细胞中EML4-ALK重排的检测结果与组织活检标本中的检测结果具有较高的符合率[5,6]。2012年，Hofman, V.等人使用ISET技术(Isolation by size of epithelial tumour cell)，根据循环肿瘤细胞直径比正常血液细胞大的特征，使用特定尺寸的微孔滤膜将循环肿瘤细胞与血液细胞分离，直径较大的循环肿瘤细胞留在滤膜上。微孔滤膜过滤技术的优势在于分离出的循环肿瘤细胞可以同时被用于下游的细胞形态学研究，因此可以通过一定的形态学判读标准将分离出来的细胞进行更精准地分类[7]，此外，这种技术捕获的循环肿瘤细胞也能用于下游免疫细胞化学或荧光原位杂交检测。但是，这种方法的缺点在于很多患者常常仅能分离出不到100个循环肿瘤细胞 ......