肖典冰

    (泗泾医院 上海 201601)

    1.材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 临床菌株 收集2018年1月—2018年10月期间，从本院患者临床无菌部位标本中分离的65株念珠菌。

    1.1.2 质控菌株 ATCC 90028白色念珠菌、ATCC22019近平滑假丝酵母菌为质控菌珠。

    1.2 方法

    1.2.1 常规鉴定 标本按常规方法培养、分离，沙保罗平板上纯培养、经革兰氏染色镜检，转种假丝酵母菌显色培养基进行鉴定，显绿色，翠绿色的是白色念珠菌;蓝灰色，铁蓝色的是热带念珠菌；粉红色，模糊有菌毛菌落较大的是克柔念珠菌；紫色的是光滑念珠菌。

    1.2.2 仪器鉴定 显色培养基上为白色菌落或显色不清楚的念珠菌，取纯培养物用法国生物梅里埃YST鉴定卡在VITEKII全自动微生物分析仪上进行鉴定。质控菌株：白假丝酵母菌ATCC90028、近平滑假丝酵母菌ATCC22019。

    1.2.3 特异性PCR检测 所有收集的菌株都用PCR扩增的方法进行最终鉴定。

    1.2.3.1 念珠菌基因组DNA提取 玻璃珠振荡法提取念珠菌属DNA；(1)准备高压过的1.5ml EP管；(2)每支EP管内分装约50μl的玻璃珠；(3)向分装好玻璃珠的EP管内加入300μl～500μl双蒸水；(4)编号，使用1μl一次性接种环，从三区挑取分纯的大菌落3～4个或小菌落7～8个 ......