无菌部位的念珠菌属的分布特点及耐药性分析
两性霉素,假丝,氟康唑,材料与方法,1材料,2方法,结果,165株念珠菌的分类,4药敏试验结果,讨论
肖典冰(泗泾医院 上海 201601)
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1 临床菌株 收集2018年1月—2018年10月期间,从本院患者临床无菌部位标本中分离的65株念珠菌。
1.1.2 质控菌株 ATCC 90028白色念珠菌、ATCC22019近平滑假丝酵母菌为质控菌珠。
1.2 方法
1.2.1 常规鉴定 标本按常规方法培养、分离,沙保罗平板上纯培养、经革兰氏染色镜检,转种假丝酵母菌显色培养基进行鉴定,显绿色,翠绿色的是白色念珠菌;蓝灰色,铁蓝色的是热带念珠菌;粉红色,模糊有菌毛菌落较大的是克柔念珠菌;紫色的是光滑念珠菌。
1.2.2 仪器鉴定 显色培养基上为白色菌落或显色不清楚的念珠菌,取纯培养物用法国生物梅里埃YST鉴定卡在VITEKII全自动微生物分析仪上进行鉴定。质控菌株:白假丝酵母菌ATCC90028、近平滑假丝酵母菌ATCC22019。
1.2.3 特异性PCR检测 所有收集的菌株都用PCR扩增的方法进行最终鉴定。
1.2.3.1 念珠菌基因组DNA提取 玻璃珠振荡法提取念珠菌属DNA;(1)准备高压过的1.5ml EP管;(2)每支EP管内分装约50μl的玻璃珠;(3)向分装好玻璃珠的EP管内加入300μl~500μl双蒸水;(4)编号,使用1μl一次性接种环,从三区挑取分纯的大菌落3~4个或小菌落7~8个 ......
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