骨关节炎软骨潮线漂移与软骨退变的相关性研究(2)
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参见附件。
2 方 法
2.1 实验方法 采用抽签法将SD大鼠随机分为正常组和模型组，每组10只。模型组第1，4，7天，用10%水合氯醛3 mL·kg-1腹腔麻醉，4%木瓜蛋白酶0.2 mL双膝关节腔注射建立骨关节炎模型[4]，8周后，取双侧膝关节股骨髁(0.4 cm×0.3 cm×
0.2 cm)常规固定、脱钙、包埋和切片，分别采用HE、番红O-固绿、甲苯胺蓝和Masson三色染色法，观察关节软骨组织形态的变化。参考Mankin's骨关节炎组织学分级方法进行评分[5]。
2.2 检测方法
2.2.1 HE染色 切片常规脱蜡，苏木精染液4 min，1%盐酸酒精分化液分色10 s，伊红染液3 min，脱水透明封片。HE染色观察软骨组织结构、软骨细胞与软骨下骨的变化。
2.2.2 番红O-固绿染色 切片常规脱蜡，新鲜配制的试剂(A)即Weigert苏木素染液染色3 min，盐酸乙醇分化液分化15 s，蒸馏水洗1 min， 固绿染色液内浸染5 min，蒸馏水洗1 min，番红 O染色液内浸染 2 min，蒸馏水洗1 min，用乙酸溶液洗涤切片1 min，脱水透明封片。番红O-固绿染色观察蛋白聚糖的变化。
2.2.3 甲苯胺蓝染色 切片常规脱蜡，0.1%甲苯胺蓝溶液10 min，蒸馏水稍洗，快速95%与100%乙醇脱水，二甲苯透明和封固。甲苯胺蓝观察蛋白多糖的变化。
2.2.4 Masson三色染色 切片常规脱蜡，Weigert苏木素A和Weigert苏木素B等比混合，染色10 min，蒸馏水洗1 min，Masson复合染色液染色15 min ......
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