痛风消颗粒对RAW264.7巨噬细胞COX—2和iNOS mRNA调控作用的研究(2)
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1.4 细胞株 RAW264.7巨噬细胞株购自中国科学院典型培养物保藏中心昆明细胞库(KCB)，编号：KCB200603YJ。小鼠RAW264.7巨噬细胞使用含有质量分数10% FBS的RPME 1640培养基(美国Invitrogen公司)，在饱和湿度、37 ℃、体积分数5%CO2通用培养条件下常规培养。当细胞生长至约80%～90%汇合时，将细胞进行1∶2传代。
2 实验方法
2.1 药物血清的制备 Wistar大鼠20只，随机分为痛风消颗粒含药血清组和生理盐水对照血清组，每组10只，雌雄各半。按血清药理学常规给药方法：3 d(day)-2 t(time)-1 h(hour)模式，即痛风消颗粒以12.15 g·kg-1剂量灌胃大鼠，给药量按照大鼠与人用药量的体表面积换算公式计算。正常对照组灌以等剂量生理盐水，每日2次，连续3 d。末次给药1 h后，用苯巴比妥0.6 mL腹腔注射麻醉后腹主动脉采血。两组均为无菌采血，在室温下放置3 h，使血液凝固后，置4 ℃冰箱过夜；放入4 000 r·min-1离心机，离心10 min分离血清；分别收集两组大鼠血清，56 ℃灭活30 min，0.2 μm
微孔滤膜过滤除菌，置-20 ℃冰箱冷冻，备用。
2.2 LPS溶液的配置 LPS粉末10 mg，加入无菌双蒸水10 mL，充分混匀，配制成质量分数为1 g·L-1的LPS溶液，分装，4 ℃冰箱保存；因其贴附能力较强，使用前旋涡混合器震荡30 min ......
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