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编号:12800141
NF—κB、IL—17与胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜细胞及血清表达的关系(2)
http://www.100md.com 2015年2月1日 风湿病与关节炎 2015年第2期
     2.6 NF-κB检测 采用Western blot法,将关节滑膜组织低温匀浆后加蛋白裂解液,置冰上40 min,于4 ℃置12 000 r·min-1离心机离心10 min,取上清。以BSA为标准,用Bradford 法对上清进行蛋白定量。取20 μg蛋白样品,质量分数10% SDS-PAGE电泳,100 V转移1 h至硝酸纤维素薄膜,放入封闭液中37 ℃封闭1 h;一抗4 ℃过夜。用不含抗体TBS-T液孵育作为阴性对照。反复洗膜后,将膜与碱性磷酸酶(AP) 标记的抗IgG抗体孵育,室温轻摇1 h;洗膜后,用Western blot印迹观察,用图像分析测定各带吸光度(A)值作定量分析。NF-κB检测过程中,匀浆液中需加蛋白保护剂。

    2.7 统计学方法 采用SPSS 16.0软件进行统计分析。计量资料以表示,两组间比较采用t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

    3 结 果

    3.1 两组一般情况 实验中,12只模型大鼠造模成功10只。模型对照组大鼠于免疫后第14天左右开始出现不同程度的关节红肿;随着免疫时间进

    展 ......
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