2.3 流式细胞术检测各组破骨细胞凋亡率 将破骨细胞接种于6孔培养板，共接种24孔，加入各组培养基后培养48 h。将各组细胞培养液吸出至各个BD管内，再用PBS洗涤细胞1次，加入适量胰酶细胞消化液(不含有EDTA)消化细胞。室温孵育2 min，轻轻将贴壁破骨细胞吹打下来，防止过度消化，迅速将细胞混悬液移入有培养液的流式管，3000 r·min-1离心3 min后弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。取3×105重悬的细胞，1000 r·min-1离心5 min后弃上清，加入500 μL Binding Buffer混匀后，加入5 μL Annexin V-FITC，再加入5 μL Propidium Iodide混匀；室温避光反应10 min；60 min内进行流式细胞仪检测细胞凋亡率。

    2.4 RANK蛋白测定 各组接种于6孔板，每组6孔，各组含药血清培养48 h后，用细胞刮刀将细胞移入蛋白裂解液。加入5X SDS-PAGE loading buffer，水煮变性蛋白，冷却后-20 ℃保存备用。经蛋白定量后 ......