柚皮苷对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响(2)
1.2 脐带间充质干细胞的制备 剖腹产后从手术台上取下脐带并浸入制备的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)之中，用外科剪去除脐带的外膜和脐带中的动静脉，将剩余的华尔通胶[2]用PBS溶液冲洗2次后，使用组织剪分成1～2 mm3大小的组织块[3]，准备细胞培养瓶，放入含有质量分数为10%的FBS的低糖DMEM培养液，培养液的量以超过组织块厚度2 mm为准，放入无菌培养箱中，恒温37 ℃、CO2饱和度为5%。每3天更换培养液，更换培养液的同时在显微镜下观察细胞融合情况，当达到70%以上后去除组织块。继续每3天换培养液，显微镜下观察到细胞达到90%融合时，准备质量分数为0.20%的胰蛋白酶使细胞悬浮。在显微镜下观察细胞90%悬浮后，按照1∶2分瓶培养并传代。扩增细胞以备后期细胞分组培养。
1.3 形态学及特异抗原检测 细胞光镜下检查：可见细胞呈旋涡状，螺旋状增殖排列。细胞表型采用流式细胞技术检测[4]，对第3代细胞表面特异抗原检测，将2.5 g·L-1胰蛋白酶消化待检细胞PBS洗涤3次，制成细胞悬浊液，待检验细胞每管
0.1 mL加入第一抗体；4 ℃冰育30 min后，PBS清洗，加入荧光标记第二抗体；4 ℃冰育30 min ......
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1.3 形态学及特异抗原检测 细胞光镜下检查：可见细胞呈旋涡状，螺旋状增殖排列。细胞表型采用流式细胞技术检测[4]，对第3代细胞表面特异抗原检测，将2.5 g·L-1胰蛋白酶消化待检细胞PBS洗涤3次，制成细胞悬浊液，待检验细胞每管
0.1 mL加入第一抗体；4 ℃冰育30 min后，PBS清洗，加入荧光标记第二抗体；4 ℃冰育30 min ......
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