益气养血方对膝骨关节炎模型大鼠血清Wnt4和WIF1的影响(3)
2.4.2 ELISA法检测大鼠血清Wnt4、WIF1表达水平 按照试剂盒说明书。操作如下：①从-20 ℃冰箱中取出冰冻血清，室温解冻备用。将试剂盒从4 ℃冰箱取出，室温平衡20 min。②选用96 T板，设标准孔和待测样品孔。标准品孔各加不同浓度的标准品50 μL，样品孔加入待测样品10 μL，再加样本稀释液40 μL，空白孔不加。
③除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔均加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100 μL，用封板膜密封。④37 ℃恒温箱温育60 min后，揭掉封板膜，弃去液体，在吸水纸上拍干，每孔加足量的洗涤液，静置1 min，将洗涤液甩去，吸水纸上拍干，如此反复5次(注意洗板时要甩尽液体，拍干，以免影响结果)。⑤每孔加入底物溶液100 μL，37 ℃避光温育15 min。每孔依次加终止液50 μL，终止反应(此时颜色改变，一般颜色越深说明阳性程度越高)。⑥在加入终止液的15 min内用酶联仪在450 nm波长处测定各孔的光密度(OD值)。同时绘制标准曲线。
2.5 统计学方法 采用SPSS 18.0软件进行统计分析。计量资料以表示，组间比较采用t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析，符合正态分布和方差齐性检验采用LSD法检验，方差不齐则采用校正t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义 ......
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③除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔均加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100 μL，用封板膜密封。④37 ℃恒温箱温育60 min后，揭掉封板膜，弃去液体，在吸水纸上拍干，每孔加足量的洗涤液，静置1 min，将洗涤液甩去，吸水纸上拍干，如此反复5次(注意洗板时要甩尽液体，拍干，以免影响结果)。⑤每孔加入底物溶液100 μL，37 ℃避光温育15 min。每孔依次加终止液50 μL，终止反应(此时颜色改变，一般颜色越深说明阳性程度越高)。⑥在加入终止液的15 min内用酶联仪在450 nm波长处测定各孔的光密度(OD值)。同时绘制标准曲线。
2.5 统计学方法 采用SPSS 18.0软件进行统计分析。计量资料以表示，组间比较采用t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析，符合正态分布和方差齐性检验采用LSD法检验，方差不齐则采用校正t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义 ......
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