独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞表达miRNA—140的影响(2)
2.4 TaqMan real-time PCR检测各组退变软骨细胞miRNA-140表达 将退变软骨细胞随机分为模型组(质量分数为10%的空白血清+ DMEM低糖培养基)和独活寄生汤组(质量分数为10%的独活寄生汤含药血清+ DMEM低糖培养基)。2组细胞分别培养24，48，72 h后，弃培养液，PBS轻柔淋洗1 min，用胰酶消化后离心机1000 r·min-1低速离心5 min，收集细胞。Trizol法提取总RNA，取2 μg RNA逆转录成cDNA，以此为模板行TaqMan real-time PCR扩增miRNA-140及U6。探针标记的miRNA-140和U6均由Applied Biosystems合成。扩增反应条件：50 ℃ 2 min，5 ℃ 10 min；92 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40个循环。扩增结束后，进行基因表达的差异分析，以U6表达为内参照基因，检测待测样品中目的基因的表达水平，以对照组数据为标准样本，各实验组为待测样品，比较待测样本相对校准样本的表达差异。因实时PCR对基因表达进行相对定量分析需要特殊的公式、假设以及对这些假设的验证 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4237 字符。
您现在查看是摘要页，全文长 4237 字符。