狗脊多糖对硝普钠诱导退变大鼠软骨细胞氧自由基影响的研究(3)
2.4 退变软骨细胞模型的复制 选取第2代软骨细胞,经计数后,调整细胞悬液计数为2×104·mL-1,使用移液枪将其接种于洁净培养瓶(4 mL),放置于37 ℃培养箱中(体积分数为5%的CO2)进行孵育细胞,每隔24 h更换1次培养液,待软骨细胞沿瓶壁生长占满约90%的空间时,按本课题组前期造模方式[7],加入1 mM SNP干预软骨细胞24 h后成模。2.5 酶联免疫吸附法测试SOD、NO、MDA的含量 选取第2代软骨细胞,按每孔1×105个·mL-1的密度接种于洁净6孔板,设置空白对照组、模型对照组、狗脊多糖組。空白对照组:向每孔加入DMEM(体积分数为10 %的胎牛血清)2 mL培养24 h后,换新每孔2 mL的DMEM液依次加入后继续培养48 h。模型对照组:每孔中加入1 mM(1000 ng·mL-1)SNP的培养基2 mL 作用24 h后,更换新含10 %胎牛血清的DMEM 2 mL继续培养48 h。狗脊多糖组:孔中加入剂量为
1 mM(1000 ng·mL-1)的SNP的培养基2 mL作用24 h后更换为不同质量分数的狗脊多糖2 mL(100 ......
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