流式细胞术检测CD4+T细胞凋亡水平。

    2.2.3 RT-PCR检测细胞凋亡相关基因表达 将TRIzol 1 mL加入提取的RA患者外周血CD4+T细胞中，吹打混匀待裂解后，加入200 μL三氯甲烷，振荡10 s后，静置3 min。随后置离心机以4 ℃，12000 r·min-1离心15 min，提取500 μL上清于无RNA酶的离心管中。然后加入等量异丙醇，静置10 min后离心机以4 ℃，12 000 r·min-1离心10 min，留取底部沉淀物。加入1 mL质量分数为75%的乙醇(DEPC水配制)，于离心机以4 ℃，12 000 r·min-1离心5 min，弃上清，室温干燥5 min。最后，加入30 μLDEPC水，-80 ℃冰箱保存备用。按照逆转录试剂盒进行逆转录。反应体系如下：2×SYBR Green mixture 5 μL;cDNA 1 μL;Forward primer1 μL;Reverseprimer 1 μL;双蒸水2 μL;反应总体积为10 μL。反应条件如下：95 ℃ 5 min，(95 ℃10 s、60 ℃ 30 s)×40个循环。各指标引物见表2。

    2.2.4 Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达 加入1 mL RIPA细胞裂解液于分离提取的CD4+T细胞中裂解30 min ......