95 ℃预变性30 s，1个循环;95 ℃变性3 s、60 ℃退火30 s，40个循环。测定目标基因Ct值，2-ΔΔCt计算目的基因相对表达量。

    2.7 Western Blot 提取软骨组织总蛋白，BCA定量，蛋白变性，上样，SDS-PAGE电泳，转膜，常温封闭，TBST洗涤;分别加入1∶5000 β-actin、1∶1000 AQP1、1∶200 AQP3一抗，4 ℃孵育过夜，洗涤;加入相应二抗，常温孵育1 h，洗涤，BeyoECL化学发光成像，软件分析条带灰度值，计算目的蛋白相对表达量。

    2.8 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行统计分析。计量资料符合正态分布以表示，采用单因素方差分析;不符合正态分布采用非参数检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

    3 结 果

    3.1 3组病理变化比较 空白对照组软骨表面光滑，未见裂隙、缺损，4层结构清晰，放射层软骨细胞成群分布、柱状排列，软骨细胞囊呈强嗜碱性，基质染色均匀。模型对照组软骨面可见缺损，缺损达移行层、部分可至放射层，缺損下方部分软骨陷窝内未见细胞核，软骨数量减少，排列尚规则、未见明显紊乱，细胞囊、软骨基质未见明显苏木素着色 ......