2.4 siRNA下调VEGFR2、PLCG1和MAPK1的表达 分别设计、优化了敲降VEGFR2、PLCG1以及MAPK1的siRNA 序列(见表1)。用罗氏X-treme GENE siRNA 转染试剂将上述siRNA序列分别转染HUVEC，72 h后，胰酶消化，收细胞-80 ℃冻存，分别进行RT-PCR和Western Blot检测敲降效率。

    2.5 RT-PCR检测siRNA 敲 降效率 取上述冻存细胞，加入1 mL Trizol按照常规方法提取总RNA。依据MBI Fermentas的逆转录试剂说明书，将RNA逆转为cDNA，然后利用表2引物分别按下述条件进行PCR反应。循环参数均为：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，31个循环后，72 ℃延伸10 min。GAPDH为内参。见表2。

    2.6 Western Blot检测siRNA敲降效率 提取各组细胞总蛋白 ......