雷公藤多苷对胶原诱导性关节炎大鼠下丘脑视交叉上核Bmal1、Clock表达的调节作用(3)
1.6.3 qRT-PCR和Western-blot法检测SCN中Bmal1、Clock基因和蛋白表达 取血同时，快速取脑，液氮速冻，抠取SCN组织，进行qRT-PCR和Western-blot检测。1.6.3.1 qRT-PCR主要步骤 ①总RNA提取：大鼠SCN组织50 μg，加入1 mL TRNzol Universal试剂提取总RNA。②cDNA合成：根据M-MLV反转录试剂盒说明，配置20 μL反应体系：5× FastKing-RT SuperMix 4 μL，RNA提取液5 μL(含total RNA 1 μg/样本)，RNase-Free dd H2O 11 μL。
于PCR仪上，42 ℃ 15 min，然后95 ℃加热3 min灭活反转录酶，逆转录合成cDNA。③PCR扩增：以cDNA为模板，根据试剂盒说明进行荧光定量PCR扩增。50 μL PCR反应体系：2×FastFire qPCR PreMix 25 μL ......
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