赵 昆，卢 磊，刘晓丹，严思敏，胡安康，李尚洪，王忠良

    (1.南京中医药大学研究生院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学附属徐州市中医院，江苏 徐州221001；3.南京鼓楼医院，江苏 南京 210000；4.徐州医科大学，江苏 徐州 221000)

    心肌缺血后再灌注损伤(ischemia reperfusion injury，IRI)指冠状动脉部分或完全急性阻塞后，在一定时间内重新获得再通时，缺血心肌虽然得以恢复正常灌注，但其组织损伤反而呈进行性加重的病理过程。IRI 可通过氧化应激、炎症等反应，引起心肌细胞凋亡、顿抑、坏死，从而减少心肌细胞存活数量，最终导致再灌注不良[1]。血管新生是保护心肌免除IRI 的机制之一，研究证实，骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)能在特定环境下分化为血管内皮细胞，促进心肌血管新生[2]，从而减轻患者的临床症状和体征[3-4]。

    防栓胶囊为南京中医药大学附属徐州市中医院院内制剂，由制首乌、槲寄生、制大黄、水蛭、石菖蒲、全蝎、川芎等组成。前期研究发现，防栓胶囊能减轻冠心病患者心脏血管内皮损伤，预防经皮冠状动脉支架植入术后再狭窄[5]。本文通过体外实验研究防栓胶囊含药血清体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对心肌缺血再灌注损伤(IRI)血管新生的作用，以期进一步明确该制剂在改善IRI血管新生的机制。

    1 实验材料

    1.1 动物 BMSCs 取材动物：健康雄性SPF 级5 周龄SD 大鼠20只，体质量(100±10.5)g；含药血清制备、IRI模型及给药动物：健康雄性SPF 级8 周龄SD 大鼠112只，体质量(230±20.1)g；由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SYXK(京)2017-0033。动物饲养条件：温度22～25 ℃，湿度(55±5)%，常规喂养。实验全程符合动物伦理学要求。

    1.2 主要试剂 胎牛血清(批号：NWG0445，Hyclone公司)；预染蛋白Marker(货号：SM0441，Fermentas 公司)；PMSF(货号：10837091001，Roche 公司)；蛋白裂解 液(RIPA)、1.5 mol/L Tris HCl(pH 6.8)、1.5 mol/LTris HCl(pH 8.8)，均为碧云天生物技术研究所产品；ECL 发光液(货号：32132，Thermo Fisher Scientific 公司)；Trizol(货号：9108-1 ......