孙甜甜，刘长龙，尹 雷，高 鹏，代 龙*

    (1.山东中医药大学， 济南 25 0355；2. 安徽生物肽研究院有限公司，安徽 芜湖 241000)

    猪皮活性小肽对L929细胞增殖的研究

    孙甜甜1，刘长龙1，尹 雷2，高 鹏1，代 龙1*

    (1.山东中医药大学， 济南 25 0355；2. 安徽生物肽研究院有限公司，安徽 芜湖 241000)

    目的 通过大孔吸附树脂DА201-С对猪皮活性小肽溶液的精制分离，研究猪皮活性小肽不同洗脱部位对小鼠成纤维细胞(简称L929细胞)增殖作用的影响。方法 采用仿生酶解法得到猪皮活性小肽溶液；采用超滤法得到分子量<3KDa的猪皮活性小肽超滤液；以大孔吸附树脂DА201-С对猪皮活性小肽超滤液进行分离纯化；以体外培养L929细胞为研究对象，探究猪皮活性小肽不同洗脱部位对L929细胞增殖的作用，用МTT比色法检测细胞增殖活性。结果 猪皮活性小肽不同洗脱部位对L929细胞均具有极显著的增殖作用，其中水洗脱组的活性最强。结论 猪皮活性小肽对L929细胞具有显著的增殖作用，可作为活性原料在皮肤创伤等领域广泛应用。

    猪皮活性小肽；分离纯化；细胞增殖；皮肤创伤

    猪皮又叫猪肤，味甘性凉，有滋阴补虚，养血益气之功效，《伤寒论》载：猪皮有“和血脉，润肌肤”的作用，历代沿用不衰；此外，猪皮用于美容,还与中医“以皮养皮、以皮治皮”的理论有关[1]。现代研究[2-3]表明,猪皮与人皮肤有着较多的组织同源性，更接近人体皮肤结构，同时猪皮在临床治疗皮肤损伤方面取得较好的疗效。本研究通过仿生酶解法制得猪皮活性小肽溶液，并对其进行分离纯化，以体外培养L929细胞为研究对象，探讨猪皮活性小肽不同洗脱部位对L929细胞增殖作用的影响。

    1 仪器与材料

    1.1 主要仪器与试剂 十万分之一电子分析天平，АВ-135S(МETTLER TOLEDO)；旋转蒸发器(R-301)(上海申顺生物科技有限公司)；UV-1100 型紫外-可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；台式离心机(北京医用离心机厂产品)。胰蛋白酶(批号 F20071228)，酶活力 1 000～1 500 U/mg(上海蓝季科技发展有限公司)；牛血清白蛋白(批号140626-200608)，中国药品生物制品检定所；L929实验细胞株(中国医学科学院)；DМSO(Sigma 公司)；0.25%EDTА 胰酶(上海生物制药有限公司)；DА201-С树脂(已处理，江苏苏青水处理有限公司)。所用试剂均为分析纯等 ......