郅晓宇，刘 鹏，董 娜，张 野，张红石*

    (1.长春中医药大学，长春 130117；2.长春中医药大学附属医院，长春 130021)

    课题组在腹部推拿治疗失眠的机制研究中，发现了脏腑推拿治疗失眠存在脑肠互动现象，且与人体脑肠肽调节密切相关。因此，本研究通过前期实验筛选，确定了两种与睡眠密切相关的脑肠肽SP与GAL，通过Western blot检测二者在下丘脑及小肠中的蛋白表达，验证腹部推拿治疗失眠存在脑肠互动现象。

    1 材料与仪器

    1.1 实验动物与分组

    64只SPF级雄性Wistar大鼠，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供[动物许可证号：SCXK(吉)-2020-0002]，7周龄，体质量(200±20)g左右。大鼠随机分成空白组、模型组、推拿组、药物组，每组16只。

    1.2 实验材料

    戊巴比妥钠(Merck公司)，PCPA(美国Sigma公司)，戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司)，碳酸氢钠(成都市科龙化工试剂厂)，阿拉伯胶(天津市光复精细化工研究所)，RIPA裂解液(碧云天生物技术公司)，BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术公司)，PBS磷酸盐缓冲液(北京中杉金桥生物技术有限公司)，人参归脾丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂)。

    1.3 实验仪器

    电泳系统(型号：Mini-ProteanTetra，美国Bio-Red公司)，转膜仪(型号：170-4150，美国Bio-Rad公司)，成像分析系统(型号：FluorChemQ，美国Proteinample公司)，离心机(ESCO MCR-88-8)。

    2 方法

    实验方案经长春中医药大学动物实验伦理审查委员会审核通过(No：2021248)，具体方法如下。

    2.1 PCPA失眠模型大鼠制作

    将加入阿拉伯胶的PCPA粉末研磨至泡沫状 ......