伏立康唑治疗梅奇酵母菌败血症1例及文献复习(1)
【关键词】伏立康唑；梅奇酵母菌；败血症
【中图分类号】R446.5 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2017.23..02
酵母菌，特别是念珠菌感染，是重症病房常见院内条件性严重血流感染，近年来非白色念珠菌酵母菌感染数量增加，偶然可发生罕见的酵母菌感染[1]。梅奇酵母菌可定植人体的某些部位，生长形态类似念珠菌，通常认为是非致病菌，我们发现一例梅奇酵母菌(Metschnikowia pulcherrima)败血症，开始微生物室误认为铁红假丝酵母菌(Candida pulcherrima)，对非白色念珠菌包括罕见酵母菌的准确诊断和治疗需要提高认识。
1 病历摘要
患者，女，16岁，主因腹胀、双下肢无力伴意识障碍10月，于2015-06-29入深圳市人民医院ICU。入院诊断：(1)播散性脑脊髓炎：迁延性昏迷，继发性癫痫，脑室积液，脑室-腹腔引流术后，中枢性尿崩症，脑耗盐综合征，脑干延髓损伤，继发性Ondine's curse 综合征，四肢软瘫，低血压状态，呼吸衰竭(呼吸机依赖)，中枢性低热；(2)格林巴雷综合征后遗症；(3)肺部感染，双侧胸腔积液；(4)泌尿系统感染；(5)体癣：继发性皮炎；(6)气管切开术后。入院后患者持续存在低热，持续依赖经气管切开机械通气，间有反复高热，最高体温达39.5度，痰培养发现鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌等，根据药敏反复更改抗生素，血培养发现白色念珠菌，尿培养热带念珠菌，予氟康唑治疗后好转，仍持续低热。2015-9-8后反复高热，血象升高，2015-9-11送深静脉导管尖培养，2015-9-13培养回报为“铁红假丝酵母菌”；于2015-9-13送外周血培养，2015-9-16提示真菌培养阳性，2015-9-19正式回报血培养“铁红假丝酵母菌”；2015-9-17真菌1-3-β-D葡聚糖定：>1000 pg/mL；之后于2015-9-25，2015-9-26多次送血培养回报仍为“铁红假丝酵母菌”，2015-9-28最高体温39.8度；根据2015-9-13深静脉导管尖培养药敏结果改用伏立康唑抗真菌治疗(2015-9-16至2015-10-10)；2015-9-28真菌1-3-β-D葡聚糖定：127.7pg/ml，继续伏立康唑抗真菌治疗，分别于2015-10-9，2015-10-16，2015-10-17多次送血培养、深静脉导管提示转阴，2015-10-8真菌1-3-β-D葡聚糖定：52.54 pg/mL，患者体温峰值较前明显下降，血象正常，体温降为平常体温约38度。伏立康唑治疗有效。
2 分离鉴定
(1)血培养阳性报警
(2)培養物转种血平板，35℃培养18-24小时
(3)挑取单个菌落转种LB肉汤，35℃摇菌过夜，提取DNA，PCR检测真菌间隔区序列(ITS)基因。PCR条件：引物序列上游引物ITS86 GTGAATCATCGAATCTTTGAAC，下液引物ITS4 TCCTCCGCTTAT
TGATATGC扩增片段长度约200 bp。PCR的反应体系：含Mg2+的10×buffer 2 μL，dNTP终浓度为200 μmol/L，上下游引物终浓度分别为0.2 μmol/L，DNA模板1 μL，TaqDNA聚合酶1 U，用灭菌去离子水补足20 μL。PCR的反应条件：95℃预变性5 min；95℃变性15 s，58℃退火30 s，72℃延伸1 min，40个循环；72℃延伸10 min。
(4)PCR产物测序。
(5)测序结果BLAST，与genbank现有序列比对同源性。
(6)同源性大于98%可认为是与该序列是同一种，同源性97%～98%可认为是与该序列是同一属。
基因测序结果证实该株真菌(原先认为是“铁红假丝酵母菌”)为梅奇酵母菌(Metschnikowia pulcherrima)。
3 文献复习及展望
酵母菌的分类较复杂，除了根据其形态特征外，还必须结合其生理生化特征进行分类[2-5]。在近期的分类学研究中，DNA碱基序列的一致性在分类中占有重要地位[6-8]。梅奇酵母属(Metschnikowia)属于酵母科中的一个属，梅奇酵母菌存在于花、水果、花蜜、昆虫(蜜蜂、果蝇属)，果实幼虫排泄物、酒[9-12]。它既可以导致水果腐烂，也可以作为替代农药对植物污染物产生拮抗作用而用于生物防治的[12-13]。有研究文献报道认为，梅奇酵母可以从人类的痰、鼻咽、阴道、直肠和血中分离出来[13-16]，在新生儿痤疮、手足癣、尿布皮炎和指甲真菌病，以及引起动物狗皮肤感染等很可能扮演在一个重要角色[16-18]。但目前针对梅奇酵母致病性的研究相对较少，本病例报告首次高度提示梅奇酵母在人体存在致病性，至于梅奇酵母的来源以及对梅奇酵母的致病性的检测及治疗需要进一步探讨，为临床工作对罕见真菌的诊治提供新的研究方向。
参考文献
[1]Paulo C，Mourao C.Veiga PM，et al.Retrospective analysis of clinical yeast isolates in a hospital in the centre of Portugal：spectrum and revision of the identification procedures.Med Mycol 2009，47：836-844.
[2]陈志良，仇荣亮.重金属污染土壤的修复技术[J].环境保护，2002 ，2 9 (6)：21-23.
[3]BrownSL，ChaneyR L，A ngl eJS ，et a1 .Zinc and cadmium uptake by hyperaccumulator Thlaspi caerulescensgrown in nutrient solution.Soil Sci Soc Am J，19 9 5，5 9：125-133., 百拇医药(温隽珉 黄泽伟 卢月梅)
【中图分类号】R446.5 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2017.23..02
酵母菌，特别是念珠菌感染，是重症病房常见院内条件性严重血流感染，近年来非白色念珠菌酵母菌感染数量增加，偶然可发生罕见的酵母菌感染[1]。梅奇酵母菌可定植人体的某些部位，生长形态类似念珠菌，通常认为是非致病菌，我们发现一例梅奇酵母菌(Metschnikowia pulcherrima)败血症，开始微生物室误认为铁红假丝酵母菌(Candida pulcherrima)，对非白色念珠菌包括罕见酵母菌的准确诊断和治疗需要提高认识。
1 病历摘要
患者，女，16岁，主因腹胀、双下肢无力伴意识障碍10月，于2015-06-29入深圳市人民医院ICU。入院诊断：(1)播散性脑脊髓炎：迁延性昏迷，继发性癫痫，脑室积液，脑室-腹腔引流术后，中枢性尿崩症，脑耗盐综合征，脑干延髓损伤，继发性Ondine's curse 综合征，四肢软瘫，低血压状态，呼吸衰竭(呼吸机依赖)，中枢性低热；(2)格林巴雷综合征后遗症；(3)肺部感染，双侧胸腔积液；(4)泌尿系统感染；(5)体癣：继发性皮炎；(6)气管切开术后。入院后患者持续存在低热，持续依赖经气管切开机械通气，间有反复高热，最高体温达39.5度，痰培养发现鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌等，根据药敏反复更改抗生素，血培养发现白色念珠菌，尿培养热带念珠菌，予氟康唑治疗后好转，仍持续低热。2015-9-8后反复高热，血象升高，2015-9-11送深静脉导管尖培养，2015-9-13培养回报为“铁红假丝酵母菌”；于2015-9-13送外周血培养，2015-9-16提示真菌培养阳性，2015-9-19正式回报血培养“铁红假丝酵母菌”；2015-9-17真菌1-3-β-D葡聚糖定：>1000 pg/mL；之后于2015-9-25，2015-9-26多次送血培养回报仍为“铁红假丝酵母菌”，2015-9-28最高体温39.8度；根据2015-9-13深静脉导管尖培养药敏结果改用伏立康唑抗真菌治疗(2015-9-16至2015-10-10)；2015-9-28真菌1-3-β-D葡聚糖定：127.7pg/ml，继续伏立康唑抗真菌治疗，分别于2015-10-9，2015-10-16，2015-10-17多次送血培养、深静脉导管提示转阴，2015-10-8真菌1-3-β-D葡聚糖定：52.54 pg/mL，患者体温峰值较前明显下降，血象正常，体温降为平常体温约38度。伏立康唑治疗有效。
2 分离鉴定
(1)血培养阳性报警
(2)培養物转种血平板，35℃培养18-24小时
(3)挑取单个菌落转种LB肉汤，35℃摇菌过夜，提取DNA，PCR检测真菌间隔区序列(ITS)基因。PCR条件：引物序列上游引物ITS86 GTGAATCATCGAATCTTTGAAC，下液引物ITS4 TCCTCCGCTTAT
TGATATGC扩增片段长度约200 bp。PCR的反应体系：含Mg2+的10×buffer 2 μL，dNTP终浓度为200 μmol/L，上下游引物终浓度分别为0.2 μmol/L，DNA模板1 μL，TaqDNA聚合酶1 U，用灭菌去离子水补足20 μL。PCR的反应条件：95℃预变性5 min；95℃变性15 s，58℃退火30 s，72℃延伸1 min，40个循环；72℃延伸10 min。
(4)PCR产物测序。
(5)测序结果BLAST，与genbank现有序列比对同源性。
(6)同源性大于98%可认为是与该序列是同一种，同源性97%～98%可认为是与该序列是同一属。
基因测序结果证实该株真菌(原先认为是“铁红假丝酵母菌”)为梅奇酵母菌(Metschnikowia pulcherrima)。
3 文献复习及展望
酵母菌的分类较复杂，除了根据其形态特征外，还必须结合其生理生化特征进行分类[2-5]。在近期的分类学研究中，DNA碱基序列的一致性在分类中占有重要地位[6-8]。梅奇酵母属(Metschnikowia)属于酵母科中的一个属，梅奇酵母菌存在于花、水果、花蜜、昆虫(蜜蜂、果蝇属)，果实幼虫排泄物、酒[9-12]。它既可以导致水果腐烂，也可以作为替代农药对植物污染物产生拮抗作用而用于生物防治的[12-13]。有研究文献报道认为，梅奇酵母可以从人类的痰、鼻咽、阴道、直肠和血中分离出来[13-16]，在新生儿痤疮、手足癣、尿布皮炎和指甲真菌病，以及引起动物狗皮肤感染等很可能扮演在一个重要角色[16-18]。但目前针对梅奇酵母致病性的研究相对较少，本病例报告首次高度提示梅奇酵母在人体存在致病性，至于梅奇酵母的来源以及对梅奇酵母的致病性的检测及治疗需要进一步探讨，为临床工作对罕见真菌的诊治提供新的研究方向。
参考文献
[1]Paulo C，Mourao C.Veiga PM，et al.Retrospective analysis of clinical yeast isolates in a hospital in the centre of Portugal：spectrum and revision of the identification procedures.Med Mycol 2009，47：836-844.
[2]陈志良，仇荣亮.重金属污染土壤的修复技术[J].环境保护，2002 ，2 9 (6)：21-23.
[3]BrownSL，ChaneyR L，A ngl eJS ，et a1 .Zinc and cadmium uptake by hyperaccumulator Thlaspi caerulescensgrown in nutrient solution.Soil Sci Soc Am J，19 9 5，5 9：125-133., 百拇医药(温隽珉 黄泽伟 卢月梅)