hsp90α基因四环素诱导调控表达质粒的构建及功能验证(2)
pRetroX-Hsp90a-EGFP-Pur的构建 以质粒pcDNA3.1-EGFP为模板PCR扩增EGFP编码基因，通过MluI和EcoRI双酶切连接连入pRetroX-Tight-Pur，获得质粒pRetroX-EGFP-Pur。将1.3.1中纯化的PCR产物和pRetroX-EGFP-Pur用NotI和MluI双酶切，连接获得质粒pRetroX-Hsp90a-EGFP-Pur，测序无误后用于后续实验。1.3.3 rtTA表达盒的扩增和单质粒Tet-on系统的构建
以pRetroX-Tet-On Advanced为模板PCR 扩增rtTA表达盒，并在其两端引入限制性内切酶BglII识别位点。将rtTA表达盒和pRetroX-Hsp90a-EGFP-Pur经BglII酶切及去磷后连接获得最终质粒pRetroX-Hsp90a-EGFP-Tet-On ......
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