hsp90α基因四环素诱导调控表达质粒的构建及功能验证(3)
四环素调控系统包括Tet-on与Tet-off系统。该实验选择Tet-on系统,在有DOX时,tetR可与tetO结合目的基因得到表达,撤去dox 转录即被抑制[10]。由于活体摄取要比清楚快得多,因此其在基因转录方面要快于Tet-off系统。相比较于传统的Tet-on系统,需要两次筛选转染,操作繁琐,该实验设计的Tet-on单质粒载体系统,经一次转染即可用于实验,操作相对简单。在启动子下游引入EGFP编码序列使过表达的目的蛋白C端标记EGFP标签,便于后续检测和实时观察。不同浓度DOX展现出不同水平的诱导能力,一定程度上可用于某些蛋白的定量表达,为这些蛋白生物学功能的揭示提供了更有力的工具。
临床统计数据表明HSP90α与肝癌的发生具有明显的相关性,其在肿瘤细胞的增殖和分化、生存和移动及血管形成中发挥重要作用[11]。有研究表明,肿瘤细胞内过表达的HSP90α通过外泌体分泌于细胞外,与底物蛋白结合,促进肿瘤细胞的侵袭迁移,在肿瘤转移过程中发挥作用。其中,基质金属蛋白酶2(MMP-2)是肿瘤细胞外HSP90α的底物之一,分泌于细胞外的 HSP90α可能通过激活其底物蛋白MMP-2增强肝癌细胞侵袭迁移能力 ......
您现在查看是摘要页,全文长 4451 字符。