影响PRF临床疗效的相关因素(1)
【摘要】富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin，PRF)，是继富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)后的第二代血小板浓缩物。因其特殊的三维立体结构和其内所含的多种生长因子，PRF在加速软、硬组织愈合中发挥重要的作用已被国内外广大学者所认可。本文就影响PRF临床疗效的相关因素研究进展作一综述。
【关键词】PRF；富血小板血浆；制备方法；相关因素
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2018.06.17..02
1 PRF的基本制备方法
选择健康人群对其进行血液的采集，其中参加研究的女性均不在月经期，采集血液的量为10 ml，将抽取的静脉血放置在试管内，且保证试管内不含抗凝剂，立即以一定转速离心。经过；离心处理后液体分为三层，其中最上层为不含细胞的血浆，最底层为红细胞层，中间层即为PRF。大约97%的血小板和>50%的白细胞以一种特定的三维分布在PRF的纤维蛋白结构中[1]。血小板中含有30多种生长因子，如血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor，PDGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)等[2]。这些生长因子还有其内的白细胞释放白细胞介素(IL-1、IL-4)、肿瘤坏死生长因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等，各因子之间发挥着协同作用，并对组织细胞有着调控作用，主要表现为对其增殖分化有影响，对炎症因子有介导作用，能够帮助创口快速愈合。尽管血小板生长因子在PRF中发挥重要作用，白细胞含量和纤维蛋白结构也是两个关键参数[1]。
2 影响PRF临床疗效的相关因素
2.1 主要因素：相对离心力和离心时间
在制备PRF的时候最为重要的是选择好离心处理的方法，离心方法受到相对离心力(relative centrifugal force，RCF)和离心时间的影响。PRF的纤维蛋白三维结构与其内的细胞分布取决于离心力[1]。血液中的细胞若是遭到了破坏，可能使离心力较高，且离心处理的时间较长。RCF受到离心转速和离心半径的影响，RCF=1.118×10-6×R×W2(其中R表示离心半径，所用单位为cm，W表示离心转速，所用单位为r/min)[2]。因此在RCF一定的情况下，由于不同品牌的离心机离心半径不同，制备PRF的转速应有所不同。(1)最早提出的PRF制备方案是Choukroun等在2001年提出。由于其内含有大量的白细胞，又被命名为L-PRF(leukocyte-PRF，L-PRF)。当时用于制备PRF的离心机是法国Nice公司的PC-02台式离心机[3]。(2)Shahram Ghanaati等在2014年使用同样的离心机制备了标准PRF(standard PRF，S-PRF)：采集全血，采集量为9ml，将其放在不含有抗凝剂的塑料管中，且塑料管有无菌玻璃涂层，进行离心处理，转速为2700 r/min，离心时间为12 min；改良型富血小板纤维蛋白(advance platelet-rich fibrin，A-PRF)：采集全血，采集量为10 ml，将其放在无菌纯玻璃管中，且其中不含有抗凝剂，进行离心处理，转速为1500 r/min，离心时间为14 min。得出：与S-PRF相比，A-PRF的纤维蛋白三维结构更为松散，其内的细胞数量更多，分布更为均匀。A-PRF似乎是自体细胞(特别是中性粒细胞和巨噬细胞)的理想供给者[4]。(3)2017年，Xuzhu Wang等制备i-PRF(injectable-platelet-rich fibrin， i-PRF)的方法如下：采集全血，采集量为10 ml，将其放在不含抗凝剂的试管内，立即以700r/min(相对离心力大约60×g)离心3 min，上层的1 ml液体被称为i-PRF(一种液体血小板浓缩物)。得出的结果为i-PRF对于更多的細胞有显著的动员作用，能够使得细胞进行迁移，产生更多的生长因子及纤维连接蛋白[5]。有实验证明：A-PRF+(low-speed+time)将血液以1300r/min的速度离心8 min，与L-PRF相比，其内的生长因子含量较高，其生物相容及成纤维细胞迁移和增殖水平较高[6]。
2.2 其他因素
(1)试管材质：李龙等证明用玻璃管制备的PRF比用塑料管制备的释放VEGF含量高[7]。Mustafa等用钛试管制备T-PRF(titanium-prepared，platelet-rich fibrin)。其血小板聚集与PRF在玻璃管内制备的情况有相似之处，其生物相容性更好。试管类型(干玻璃或玻璃涂层塑料管)，似乎没有影响这种自体生物材料的结构。(2)除水方式：对PRF凝胶进行脱水处理，按照速度的快慢分为缓慢脱水和快速脱水，在释放生长因子的含量上差异不显著[8]。(3)储存方法：李龙等的实验证明4℃比37℃培养条件下PRF释放的VEGF含量更高。
3 小 结
虽然国内关于PRF生长因子含量的测定实验有很多，但是其制备没有一个标准的流程，导致生长因子含量不稳定，从而影响了其临床疗效。因此， 将离心转速换算成相对离心力，能够大幅度减小实验误差，为临床工作提供更可靠的制备方法。
参考文献
[1]Dohan Ehrenfest D M，Del Corso M， Diss A， et al. Three-Dimensional Architecture and Cell Composition of a Choukroun's Platelet-Rich Fibrin Clot and Membrane[J]. Journal of Periodontology，2010，81(4)：546-555., http://www.100md.com(辛酉凤 赵金)
【关键词】PRF；富血小板血浆；制备方法；相关因素
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2018.06.17..02
1 PRF的基本制备方法
选择健康人群对其进行血液的采集，其中参加研究的女性均不在月经期，采集血液的量为10 ml，将抽取的静脉血放置在试管内，且保证试管内不含抗凝剂，立即以一定转速离心。经过；离心处理后液体分为三层，其中最上层为不含细胞的血浆，最底层为红细胞层，中间层即为PRF。大约97%的血小板和>50%的白细胞以一种特定的三维分布在PRF的纤维蛋白结构中[1]。血小板中含有30多种生长因子，如血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor，PDGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)等[2]。这些生长因子还有其内的白细胞释放白细胞介素(IL-1、IL-4)、肿瘤坏死生长因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等，各因子之间发挥着协同作用，并对组织细胞有着调控作用，主要表现为对其增殖分化有影响，对炎症因子有介导作用，能够帮助创口快速愈合。尽管血小板生长因子在PRF中发挥重要作用，白细胞含量和纤维蛋白结构也是两个关键参数[1]。
2 影响PRF临床疗效的相关因素
2.1 主要因素：相对离心力和离心时间
在制备PRF的时候最为重要的是选择好离心处理的方法，离心方法受到相对离心力(relative centrifugal force，RCF)和离心时间的影响。PRF的纤维蛋白三维结构与其内的细胞分布取决于离心力[1]。血液中的细胞若是遭到了破坏，可能使离心力较高，且离心处理的时间较长。RCF受到离心转速和离心半径的影响，RCF=1.118×10-6×R×W2(其中R表示离心半径，所用单位为cm，W表示离心转速，所用单位为r/min)[2]。因此在RCF一定的情况下，由于不同品牌的离心机离心半径不同，制备PRF的转速应有所不同。(1)最早提出的PRF制备方案是Choukroun等在2001年提出。由于其内含有大量的白细胞，又被命名为L-PRF(leukocyte-PRF，L-PRF)。当时用于制备PRF的离心机是法国Nice公司的PC-02台式离心机[3]。(2)Shahram Ghanaati等在2014年使用同样的离心机制备了标准PRF(standard PRF，S-PRF)：采集全血，采集量为9ml，将其放在不含有抗凝剂的塑料管中，且塑料管有无菌玻璃涂层，进行离心处理，转速为2700 r/min，离心时间为12 min；改良型富血小板纤维蛋白(advance platelet-rich fibrin，A-PRF)：采集全血，采集量为10 ml，将其放在无菌纯玻璃管中，且其中不含有抗凝剂，进行离心处理，转速为1500 r/min，离心时间为14 min。得出：与S-PRF相比，A-PRF的纤维蛋白三维结构更为松散，其内的细胞数量更多，分布更为均匀。A-PRF似乎是自体细胞(特别是中性粒细胞和巨噬细胞)的理想供给者[4]。(3)2017年，Xuzhu Wang等制备i-PRF(injectable-platelet-rich fibrin， i-PRF)的方法如下：采集全血，采集量为10 ml，将其放在不含抗凝剂的试管内，立即以700r/min(相对离心力大约60×g)离心3 min，上层的1 ml液体被称为i-PRF(一种液体血小板浓缩物)。得出的结果为i-PRF对于更多的細胞有显著的动员作用，能够使得细胞进行迁移，产生更多的生长因子及纤维连接蛋白[5]。有实验证明：A-PRF+(low-speed+time)将血液以1300r/min的速度离心8 min，与L-PRF相比，其内的生长因子含量较高，其生物相容及成纤维细胞迁移和增殖水平较高[6]。
2.2 其他因素
(1)试管材质：李龙等证明用玻璃管制备的PRF比用塑料管制备的释放VEGF含量高[7]。Mustafa等用钛试管制备T-PRF(titanium-prepared，platelet-rich fibrin)。其血小板聚集与PRF在玻璃管内制备的情况有相似之处，其生物相容性更好。试管类型(干玻璃或玻璃涂层塑料管)，似乎没有影响这种自体生物材料的结构。(2)除水方式：对PRF凝胶进行脱水处理，按照速度的快慢分为缓慢脱水和快速脱水，在释放生长因子的含量上差异不显著[8]。(3)储存方法：李龙等的实验证明4℃比37℃培养条件下PRF释放的VEGF含量更高。
3 小 结
虽然国内关于PRF生长因子含量的测定实验有很多，但是其制备没有一个标准的流程，导致生长因子含量不稳定，从而影响了其临床疗效。因此， 将离心转速换算成相对离心力，能够大幅度减小实验误差，为临床工作提供更可靠的制备方法。
参考文献
[1]Dohan Ehrenfest D M，Del Corso M， Diss A， et al. Three-Dimensional Architecture and Cell Composition of a Choukroun's Platelet-Rich Fibrin Clot and Membrane[J]. Journal of Periodontology，2010，81(4)：546-555., http://www.100md.com(辛酉凤 赵金)