血脂康对OX—LDL诱导巨噬细胞组织因子(TF)表达的影响及相关机制(2)
1.4.3 细胞培养上清MDA及SOD活性检测各组细胞培养48小时，收集各组细胞培养上清液，-70℃保存。根据试剂盒的说明，检测各组细胞培养上清中MDA含量和SOD活性。
1.4.4 western blot 检测TF表达
各实验组实验终点时收集细胞，经PBS洗涤3次，加入悬浮细胞裂解液裂解细胞，置于冰上20 min厚，于4℃，13000 g离心20 min，小心吸出上清液，Bradford法检测蛋白浓度，100 ?g蛋白/泳道加入等体积2×SDS凝胶加样缓冲液，混匀，煮沸5～10 min使蛋白变性，趁热12000 rpm离心5 min，然后按预定顺序加样。80 V积层胶，120 V分离胶，电泳分离蛋白质，200 mA 2 h转膜.5%脱脂奶粉封闭4 h，加入一抗，4℃ 8 h，PBST洗膜3次，每次
15 min；加入辣根过氧化物酶标记的二抗孵育1 h，PBST洗膜3次，每次15 min。用增强化学发光剂(ECL)进行化学发光后条带放入Alpha ImagerTM 2200图像分析处理系统 ......
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