校正因子法测定血塞通片中5种皂苷类成分的含量(1)
【摘要】目的 考察校正因子法测定血塞通片中5个主要皂苷类成分含量的可行性和技术适应性。
方法 血塞通片中，以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd的含量为依据，相同色谱条件下，考察不同仪器的相对保留时间、相对校正因子；比较校正因子法与外标法测定的结果，验证校正因子法的准确性和可行性。结果 校正因子法与外标测定结果无显著差异，血塞通片可以采用校正因子法来定量分析其中主要皂苷类成分的含量。结论 以校正因子法测定血塞通片中皂苷类主要成分含量是可行的、准确的。
【关键词】校正因子；HPLC；血塞通片
【中图分类号】R259 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2018.33..03
血塞通片由三七总皂苷加适量辅料制成，用于活血祛瘀，通脈活络，抑制血小板聚集和增加脑血流量。用于脑路瘀阻，中风偏瘫，心脉瘀阻，胸痹心痛；脑血管病后遗症，冠心病、心绞痛属上述症候者[1]。三七总皂苷含有人参皂昔Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh，三七皂昔Rl、R2、R3、R4、R6等20多种皂苷成分[2]，其中以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd含量最高。现有标准基本都是用三七总皂苷标准品为对照品，利用5%香兰醛冰醋酸溶液、高氯酸与其显色后测定吸光度的方法[3]，测定样品中三七总皂苷的含量，实验过程复杂，准确度没有HPLC法高。本试验用高效液相色谱，利用校正因子法[4]，同时测定血塞通片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd的含量，为血塞通片的质量控制建立一种高效准确的检测方法。
1 仪器与试药
仪器：戴安U3000高效液相色谱仪；安捷伦Agilent 1260高效液相色谱仪；XS205型电子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO)。
试药：三七皂苷R1(中检院，批号：110745-201318)；人参皂苷Rg1(中检院，批号：110703-201731)；人参皂苷Re(中检所，批号：110754-201626)；人参皂苷Rb1(中检所，批号：110704-201424)；人参皂苷Rd(中检所，批号：111818-201302)。
样品：分别由A、B、C、D、E五家企业生产。
试剂：甲醇、乙腈(色谱纯，江苏汉邦科技有限公司)
2 方法与结果
2.1 一般方法学考察
2.1.1 色谱条件及系统适应性
Welch Ultimate PG-C18(250 mm×4.60 mm，5 ?m)和Phenomenex Gemini-NX，C18(250 mm×4.60 mm，5 ?m)；检测波长：203 nm；流动相：乙腈-水(按表1梯度洗脱，)；柱温35℃，流速1.2 ml/min。见表1。
2.1.2 对照品溶液的制备
准确称取适量三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd对照品，加适量甲醇溶解，制成浓度为0.15 mg/mL的溶液，即得。
2.1.3 供试品溶液的制备
取血塞通片样品，研细，精密称取适量(约相当于三七总皂苷25 mg)，置50 mL量瓶中，加入甲醇适量，超声30 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.1.4 线性试验
精密吸取三七皂苷R1等上述五种皂苷的对照品溶液，按照2.1.1项下的色谱条件分别进样0.5 ?L、1 ?L、2 ?L、5 ?L、10 ?L、20 ?L，25 ?L记录峰面积。以含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程分别为三七皂苷R1：Y=244.33x+2.149，R2=0.9998；人参皂苷Rg1：Y=367.32x-5.2452，R2=0.9999；人参皂苷Re：Y=300.08x-4.0476，R2=1；人参皂苷Rb1：Y=254.65x-2.9866，R2=1；人参皂苷Rd：Y=288.28x-49994，R2=0.9999。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd分别在0.0893～4.465 ?g、0.0807～4.115 ?g、0.0774～3.872 ?g、0.0836～4.181 ?g、0.0817～4.086 ?g的范围内线性关系良好。
2.1.5 精密度试验
精密吸取三七皂苷R1等上述五种皂苷的对照品溶液，按2.1.1项下的色谱条件连续进样6次，每次10 ?L，记录峰面积，计算得到峰面积的RSD分别为0.5%、0.2%、0.3%、0.2%、0.4%。结果表明仪器精密度符合实验要求。
2.1.6 稳定性试验
精密吸取三七皂苷R1等上述五种皂苷的对照品溶液，按2.1.1项下的色谱条件，在0、1、6、8、12、24、48、72 h
分别进样，每次10 ?l，记录峰面积，计算得到峰面积的RSD分别为0.11%、0.14%、0.27%、0.10%、0.15%。结果表明五种对照品溶液在72 h内稳定。
2.1.7 加样回收率试验
称取样品A粉末0.1 g，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，分别精密加入三七皂苷R1等上述五种皂苷的对照品各适量，超声30 min，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液。按照2.1.1项下的色谱条件进样，记录峰面积，平行操作6份。计算得到五者的加样回收率，三七皂苷R1：99.5%、100.2%、100.2%、97.5%、99.6%、99.3%、平均99.4%，RSD%为1.0%；人参皂苷Re：99.1%、98.7%、97.5%、99.1%、99.1%、100.0%、平均98.9%，RSD%为0.9%；人参皂苷Rg1：97.9%、100.2%、100.6%、99.5%、99.7%、98.9%、平均99.4%，RSD%为1.0%；人参皂苷Rb1：97.5%、100.0%、97.3%、100.3%、100.2%、100.4%、平均99.3%，RSD%为1.8%；人参皂苷Rd：99.4%、98.3%、101.8%、100.5%、100.7%、97.6%、平均99.7%，RSD%为1.6%。结果可以看出加样回收率试验符合要求。, 百拇医药(张艳)
方法 血塞通片中，以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd的含量为依据，相同色谱条件下，考察不同仪器的相对保留时间、相对校正因子；比较校正因子法与外标法测定的结果，验证校正因子法的准确性和可行性。结果 校正因子法与外标测定结果无显著差异，血塞通片可以采用校正因子法来定量分析其中主要皂苷类成分的含量。结论 以校正因子法测定血塞通片中皂苷类主要成分含量是可行的、准确的。
【关键词】校正因子；HPLC；血塞通片
【中图分类号】R259 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2018.33..03
血塞通片由三七总皂苷加适量辅料制成，用于活血祛瘀，通脈活络，抑制血小板聚集和增加脑血流量。用于脑路瘀阻，中风偏瘫，心脉瘀阻，胸痹心痛；脑血管病后遗症，冠心病、心绞痛属上述症候者[1]。三七总皂苷含有人参皂昔Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh，三七皂昔Rl、R2、R3、R4、R6等20多种皂苷成分[2]，其中以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd含量最高。现有标准基本都是用三七总皂苷标准品为对照品，利用5%香兰醛冰醋酸溶液、高氯酸与其显色后测定吸光度的方法[3]，测定样品中三七总皂苷的含量，实验过程复杂，准确度没有HPLC法高。本试验用高效液相色谱，利用校正因子法[4]，同时测定血塞通片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd的含量，为血塞通片的质量控制建立一种高效准确的检测方法。
1 仪器与试药
仪器：戴安U3000高效液相色谱仪；安捷伦Agilent 1260高效液相色谱仪；XS205型电子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO)。
试药：三七皂苷R1(中检院，批号：110745-201318)；人参皂苷Rg1(中检院，批号：110703-201731)；人参皂苷Re(中检所，批号：110754-201626)；人参皂苷Rb1(中检所，批号：110704-201424)；人参皂苷Rd(中检所，批号：111818-201302)。
样品：分别由A、B、C、D、E五家企业生产。
试剂：甲醇、乙腈(色谱纯，江苏汉邦科技有限公司)
2 方法与结果
2.1 一般方法学考察
2.1.1 色谱条件及系统适应性
Welch Ultimate PG-C18(250 mm×4.60 mm，5 ?m)和Phenomenex Gemini-NX，C18(250 mm×4.60 mm，5 ?m)；检测波长：203 nm；流动相：乙腈-水(按表1梯度洗脱，)；柱温35℃，流速1.2 ml/min。见表1。
2.1.2 对照品溶液的制备
准确称取适量三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd对照品，加适量甲醇溶解，制成浓度为0.15 mg/mL的溶液，即得。
2.1.3 供试品溶液的制备
取血塞通片样品，研细，精密称取适量(约相当于三七总皂苷25 mg)，置50 mL量瓶中，加入甲醇适量，超声30 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.1.4 线性试验
精密吸取三七皂苷R1等上述五种皂苷的对照品溶液，按照2.1.1项下的色谱条件分别进样0.5 ?L、1 ?L、2 ?L、5 ?L、10 ?L、20 ?L，25 ?L记录峰面积。以含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程分别为三七皂苷R1：Y=244.33x+2.149，R2=0.9998；人参皂苷Rg1：Y=367.32x-5.2452，R2=0.9999；人参皂苷Re：Y=300.08x-4.0476，R2=1；人参皂苷Rb1：Y=254.65x-2.9866，R2=1；人参皂苷Rd：Y=288.28x-49994，R2=0.9999。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd分别在0.0893～4.465 ?g、0.0807～4.115 ?g、0.0774～3.872 ?g、0.0836～4.181 ?g、0.0817～4.086 ?g的范围内线性关系良好。
2.1.5 精密度试验
精密吸取三七皂苷R1等上述五种皂苷的对照品溶液，按2.1.1项下的色谱条件连续进样6次，每次10 ?L，记录峰面积，计算得到峰面积的RSD分别为0.5%、0.2%、0.3%、0.2%、0.4%。结果表明仪器精密度符合实验要求。
2.1.6 稳定性试验
精密吸取三七皂苷R1等上述五种皂苷的对照品溶液，按2.1.1项下的色谱条件，在0、1、6、8、12、24、48、72 h
分别进样，每次10 ?l，记录峰面积，计算得到峰面积的RSD分别为0.11%、0.14%、0.27%、0.10%、0.15%。结果表明五种对照品溶液在72 h内稳定。
2.1.7 加样回收率试验
称取样品A粉末0.1 g，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，分别精密加入三七皂苷R1等上述五种皂苷的对照品各适量，超声30 min，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液。按照2.1.1项下的色谱条件进样，记录峰面积，平行操作6份。计算得到五者的加样回收率，三七皂苷R1：99.5%、100.2%、100.2%、97.5%、99.6%、99.3%、平均99.4%，RSD%为1.0%；人参皂苷Re：99.1%、98.7%、97.5%、99.1%、99.1%、100.0%、平均98.9%，RSD%为0.9%；人参皂苷Rg1：97.9%、100.2%、100.6%、99.5%、99.7%、98.9%、平均99.4%，RSD%为1.0%；人参皂苷Rb1：97.5%、100.0%、97.3%、100.3%、100.2%、100.4%、平均99.3%，RSD%为1.8%；人参皂苷Rd：99.4%、98.3%、101.8%、100.5%、100.7%、97.6%、平均99.7%，RSD%为1.6%。结果可以看出加样回收率试验符合要求。, 百拇医药(张艳)