金培峰，张浩，郑亮承，蒋成榜，孙成超

    (1.温州医学院附属第一医院 心胸外科，浙江 温州 325000；2.中国医学科学院阜外心血管病医院 卫生部心血管疾病再生医学重点实验室，北京 100037)

    干细胞治疗心肌梗死已被证实是一种较有前景的治疗方法。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)由于具有取材容易、体外增殖能力强、低免疫原性、可分化为不同类型的成熟细胞等优点[1-2]，成为最佳的移植细胞来源。但是和其他体细胞类似，BMSCs也易受各种因素如：年龄、氧化应激和高糖[3-4]等的影响而导致其生物学性状改变。

    糖尿病患者复杂的体内环境，包括长期的高血糖、高血脂、酮体的增多、活性氧等，势必会对自身体内的BMSCs产生影响[5-6]。目前国内外在干细胞治疗心梗的研究中，大多采用正常或者年轻的BMSCs作为移植细胞来源。为了确定糖尿病体内环境对BMSCs的影响以及其能否作为自体移植的细胞来源，我们将以糖尿病大鼠来源的BMSCs作为研究对象，在体外培养条件下进行一系列的生物学特性检测，就此问题进行初步探讨。

    1 材料和方法

    1.1 动物 220g Spraque Dawley(SD)大鼠由温州医学院实验动物中心提供，所有研究都经温州医学院实验动物委员会批准。

    1.2 主要试剂 DMEM、胰蛋白酶、胎牛血清购自Gibco公司；链脲佐菌素(STZ)、Hoechst 33342购自Sigma公司；细胞低氧培养盒、缺氧催化剂购自BioM6rieux-sa(France)；膜联蛋白(annexin)-V FITC细胞凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物公司；酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自R&D公司。

    1.3 糖尿病大鼠模型的制备 12只健康的SD大鼠随机平均分为两组，分别为糖尿病组和正常对照组。两组大鼠在禁食12h后分别予单次腹腔注射STZ柠檬酸缓冲液(55mg/kg)和柠檬酸缓冲液。3 d后剪尾静脉测血糖，以>16.67 mmol/L视为糖尿病模型成功，腹腔注射后3周复测1次尾静脉血糖和体重，以确保血糖浓度>16.67 mmol/L。糖尿病模型合格的和正常对照组大鼠继续饲养10周，为下面实验做准备。

    1.4 骨髓间充质干细胞的分离和培养 无菌条件下分别剥离糖尿病大鼠和正常对照大鼠的股骨和胫骨[3] ......