郑亦胡，周蒙滔，单云峰，张启瑜

    (温州医学院附属第一医院 普通外科，浙江 温州 325000)

    近年来，大量研究证实三氧化二砷在体外对于多种恶性肿瘤细胞具有诱导凋亡作用，包括胃癌、肺癌、乳腺癌、肝细胞癌、鼻咽癌、胆囊癌、宫颈癌和子宫内膜癌[1-2]，但是对于三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制却仍然存在争议。下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达是一种重要的作用机制[2-4]。最新的研究却发现，Bcl-2具有细胞保护和破坏两种表型，其不同的表型被其蛋白构象所调控[5]，这种构象的改变可以使Bcl-2从一个细胞保护作用变成破坏作用。本实验拟研究三氧化二砷是否能够诱导SGC7901胃癌细胞凋亡并观察Bcl-2的表达量和表型的变化，探讨其诱导凋亡的机制。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂 三氧化二砷购自哈尔滨伊达药业公司，浓度：10 mg/10 mL。RPMI1640培养液和胎牛血清购自美国Invitrogen公司。抗Bcl-2 N端兔多抗IgG、抗Bcl-2鼠单抗IgG、抗β-actin鼠单抗IgG1购自美国Santa Cruz公司。抗Bcl-2 BH3结构域抗体购自美国Abgent公司。辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗鼠二抗、Cy3 标记的抗兔IgG、DAPI染料购自碧云天生物研究所。CCK-8试剂盒购自日本同仁化学研究所。哺乳动物蛋白抽提试剂购自美国Thermo Scientific公司。聚偏二氟乙烯 (PVDF)膜购自美国Millipore公司。ECL化学发光检测试剂盒购自美国Pierce公司。

    1.2 细胞培养 人胃癌细胞株SGC7901购自中科院上海细胞研究所，予含10%胎牛血清的RPMI1640培养液，在5% CO2饱和湿度的37 ℃孵箱中培养，细胞长满后经胰酶消化法传代。

    1.3 实验设计 首先使用细胞毒检测求得三氧化二砷作用SGC7901胃癌细胞24 h的50%细胞死亡的浓度(IC50)，再用IC50的浓度作用SGC7901胃癌细胞 ......