金晨慈，蒋龙翔

    (温州市中西医结合医院 呼吸科，浙江 温州 325000)

    苦参碱(MT)是苦参根及苦豆子等中草药的活性成分， 是苦参碱类生物碱的代表，属于四环的噻嗪啶类，具有抗炎、免疫抑制、抗病毒、抗肿瘤等作用[1-2]。国内外研究发现MT对多种肿瘤细胞有一定的杀伤作用[3]。本研究为苦参碱对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响， 探讨其对人肺鳞癌可能的作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂 苦参碱由西安林海生物工程有限公司提供。RPMI1640、胰蛋白酶及胎牛血清为Gibco产品。四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DM-SO)、牛血清白蛋白(BSA)均为Sigma公司产品。Bcl-2、bax和caspase-3多克隆抗体购自cellsignal公司。

    1.2 细胞培养 人肺鳞癌细胞株SK-MES-1购自中科院细胞库，常规培养于含10%新生牛血清的RPMI1640培养液中，置于37 ℃，5% CO2培养箱内传代培养，以0.25%胰蛋白酶消化传代。

    1.3 MTT法检测苦参碱对SK-MES-1细胞增殖的影响 取对数生长期的SK-MES-1细胞，消化后重悬，以5×107/L的密度接种到96孔培养板，每孔加100μL细胞悬液。实验设对照组、不同浓度药物组细胞，贴壁后加入不同浓度苦参碱20μL，使其终浓度分别为0、7.5、15、30、60、120、240 mg/L。每组设6个复孔。加入药物后，分别培养24、48、72 h，每孔加入MTT液(5 g/L)10μL，培养4 h后，吸去培养液，每孔加入150μL DM-So，置酶标仪570 nm波长处，测吸光度值，并按下列公式计算细胞增殖抑制率: 细胞增殖抑制(%)=(1-处理组OD570值/空白对照组OD570值)×100%。实验重复3次。

    1.4 流式细胞仪检测苦参碱对SK-MES-1细胞凋亡率的影响 取对数生长的细胞以每瓶2×106的密度接种于培养瓶中 ......