黄晓燕，陈碧新，高瞻，张明英，王赛斌，杨德业

    (温州医学院附属第一医院 心内科，温州医学院 心血管生物和基因研究所，浙江 温州 325000)

    在我国高血压病人群中，高血压性视网膜病变的阳性率为70%左右，其所致眼底血管的改变基本上与高血压3个时期的变化相一致，在一定程度上能反映体内动脉的情况，对判断高血压病的严重程度和预后有一定的价值[1]。有关高血压性视网膜病变的发病机制尚未明了，其微血管结构改变大多是通过检眼镜或眼底荧光素血管造影观察到的，如江时森等[2]通过墨汁灌注法观察到自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)视网膜微动脉存在微血管稀少现象，但在这一病理过程中，视网膜微血管病变是否与细胞凋亡有关鲜见报道。近年来，随着视网膜微血管消化铺片技术的应用，使直接观察视网膜微血管的形态学变化成为了可能。本研究应用视网膜消化铺片，HE染色直接观察视网膜微血管的形态学特征，并对微血管进行定量分析，同时采用TUNEL法特异性标记来观察13周龄和18周龄SHR视网膜毛细血管细胞凋亡情况，旨在探讨细胞凋亡与高血压视网膜微血管病变的关系。

    1 材料和方法

    1.1 动物模型和试剂 雄性SHR和正常血压大鼠(Wistar-Kyoto，WKY)各10只(其中13，18周龄各5只)，由上海中科院实验动物中心提供。大鼠饲养在温州医学院动物中心的标准化饲养房，饮自来水，标准饲料喂养，生活在昼夜节律为12 h、保持一定温度和湿度的空间。原位细胞凋亡检测试剂盒购于美国Roche公司。显色剂为DAB，购于福州迈新生物技术有限公司。

    1.2 血压测定及眼底拍照 用0.35%戊巴比妥麻醉大鼠后，在安静状态下用计算机化多导生理记录仪间接测定鼠尾动脉收缩压，同时在裂隙灯下观察各组大鼠眼底动脉情况，拍照。

    1.3 视网膜血管消化铺片的制备 过量麻醉处死大鼠，用新鲜配制的4%多聚甲醛心脏灌流固定后摘除眼球，将眼球置于4%多聚甲醛中4 ℃ 24 h。在显微镜下自角膜缘后0.5 mm处剪开眼球，去除眼前节和玻璃体，剥离视网膜，将其放入3%胰蛋白酶溶液内，37 ℃孵育2～3 h，消化神经组织，然后在蒸馏水中轻轻吹打，仅留一薄层透明的视网膜血管网，将其贴于洁净的载玻片上，自然干燥，待染色。

    1.4 视网膜血管形态学改变观察 将制备好的消化铺片进行HE染色，光镜下观察视网膜血管形态学改变 ......