吴彬，金露，王小同，任惠明

    (温州医学院附属第二医院 脑科、康复中心，浙江 温州 325027)

    慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)发病率近年来不断上升，每年约有250万人死于COPD，已经成为威胁人类生命的第5大死因[1]。既往研究发现，在慢性低氧高二氧化碳条件下，实验动物认知功能发生损害[2]。但是引起认知功能障碍的病理生理机制目前尚未十分清楚，神经细胞凋亡可能是慢性低氧高二氧化碳导致大鼠学习记忆障碍的神经生物学机制之一[3]。此外，慢性低氧高二氧化碳还可引起老鼠神经元及胶质细胞水肿和海马部位细胞因子表达异常[3-5]。线粒体是“细胞能量工厂”，其主要功能是将有机物氧化产生的能量转化为ATP，是有氧呼吸产生能量的主要场所，对细胞的增殖、衰老、凋亡有着至关重要的作用[5-7]。本实验采用慢性低氧高二氧化碳小鼠模型，探讨慢性低氧高二氧化碳对实验动物的大脑线粒体功能的影响。

    1 材料和方法

    1.1 动物 C57BL/6小鼠，SPF级30只，雄性，7～9月龄，约28 g(温州医学院实验动物中心提供)。

    1.2 动物分组及模型建立 实验动物随机分成2组，每组15只：分为A组(低氧高二氧化碳组)和B组(正常对照组)。A组置于低氧高二氧化碳舱中(吸入气O2浓度为9%～11%，CO2浓度为5%～6%)，每天8 h每周6 d，持续4周；其余时间与B组生活在同一室内(室温22～26 ℃，相对湿度50%～70%)。为了使A组动物能适应，每次O2浓度从21%降至10%的时间控制在15～20 min，CO2浓度升高至5%的时间控制在30 min。B组小鼠吸入空气，其他条件与A组相同。

    1.3 取材和方法

    1.3.1 取材及SOD，GSH测定：直接用颈椎脱臼法处死，断头剥离颅骨，完整取出脑组织，置于冰盘上，去除脑干和小脑，沿矢状裂将脑组织一分为二。用脑组织匀浆测量其SOD，GSH含量(具体按照南京建成提供的说明书操作)。

    1.3.2 脑组织线粒体的提取：采用差速离心法分离提取脑组织线粒体。取脑组织立即放入4 ℃新配制的分离介质(含0.25 mol/L sucrose、0.1 mol/L Tris-Hcl、0.01 mol/L EDTA ......