陈相达，戴慧慧，刘燕，李圆圆，翁丛丛，茹波，曾爱兵

    (温州医学院，浙江 温州 325035，1.仁济学院；2.生命科学学院)

    一株高产淀粉酶枯草芽孢杆菌的筛选、鉴定及产酶条件的优化

    陈相达1，戴慧慧1，刘燕1，李圆圆1，翁丛丛1，茹波1，曾爱兵2

    (温州医学院，浙江 温州 325035，1.仁济学院；2.生命科学学院)

    目的：筛选出α-淀粉酶高产菌株，对其发酵特性及分类鉴定进行研究，为丰富产淀粉酶菌种资源和进一步挖掘该菌株的应用价值奠定基础。方法：通过初筛、复筛获得高酶活菌株XW86，利用传统的形态观察、系统生理生化反应并结合16S rDNA的序列分析，经Blast序列比对构建其系统进化树，确定其分类定位。通过单因素选择实验以及进一步的正交实验和多因素交互实验，进行产酶条件优化。结果：XW86与已报道的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilisstrain QD517)亲缘关系最近，二者的16S rDNA序列相似性为99%，生理生化反应谱与16S rDNA序列分析一致鉴定为枯草芽孢杆菌。XW86最适产酶条件为：在LB基础培养基中添加0.75%吐温、0.5%淀粉，初始pH 6.5，35 ℃培养120 h。液体发酵得到的粗酶液酶活可高达2200 U/dL，比优化前提高2.8倍。结论：初步鉴定XW86为枯草芽孢杆菌，产酶因素的最佳组合对其淀粉酶活性有很大的优化空间。该野生型菌株可为淀粉酶发酵工业新备选菌株的开发应用提供资源，也为进一步克隆获得产淀粉酶基因的研究奠定基础。

    α-淀粉酶；枯草芽孢杆菌；条件优化；鉴定

    α-淀粉酶能分解淀粉为糊精、低聚糖和单糖类[1]，它是最早实现工业化生产并迄今为止用途最广、产量最大的一类酶制剂品种，占据了工业化酶制剂市场约25%的市场价额，广泛用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织品工业和医药等行业，几乎完全替代了化合试剂在淀粉工业中的使用[2-3]。如何在自然界中筛选更多更好的产淀粉酶菌株，以及如何提高菌株的产酶性能是受到普遍关注的问题。国外著名公司novozyme及genencor不断推出新的优良菌株[4]，这势必对我国酶制剂行业造成一定的压力，因此开发新的菌株具有十分重要的意义。为此，本研究从浙江省温州市区16个不同地点采样筛选解淀粉菌株，获得了一株高产α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌XW86，初步研究了XW86液体发酵的产酶特性和分类鉴定， 为丰富产淀粉酶菌种资源和进一步挖掘该菌株的应用价值奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1材料 ......