庄彦，徐希，章圣辉，俞康

    (温州医学院附属第一医院，浙江 温州 325000，1.血液科；2.医学科学研究所)

    榄香烯(elemene)是从姜科植物温郁金(温莪术，curcuma Wenyujin)中提取的半萜烯类化合物，其主要成分是为β-榄香烯(化学名：1-甲基-1-乙烯基-2，4-二异丙基环己烷；分子式：C15H24，分子量：204)，是我国自行开发研制的II类非细胞毒性抗肿瘤药[1]，由于其抗瘤谱广[2]，疗效确切，能够逆转肿瘤多药耐药并具有镇痛[3]、放化疗增敏作用[4]，且不良反应轻微，无骨髓抑制，无肝肾损害，因而越来越多的在肿瘤的临床治疗中获得应用。本实验通过榄香烯对慢性粒细胞白血病急性髓系变的K562细胞株体外和体内的抑制作用，探讨其用于髓系白血病治疗的可能性。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂及仪器：K562细胞株由本室保存；榄香烯乳注射液由大连金港制药有限公司提供(0909251)；胎牛血清、RPMI1640购自美国GIBCO公司；AnnexinV/PI购自美国invitrogen公司；Cell Counting Kit-8(CCK-8)购自日本同仁化学研究所；DAPI染液购自碧云天生物研究所；FACS Calibur流式细胞仪(美国BD公司)；荧光显微镜OLYMPUS BX41；全自动酶标仪ELX400。

    1.1.2 实验动物：SPF 级SCID Beige小鼠，6～8周龄，体重为16～20 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2006-0009。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：K562细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，37 ℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中培养，每2 d换液1次，取对数生长期细胞进行实验。

    1.2.2 细胞生长抑制试验：K562细胞以1.0×104个/孔接种到96孔板中，使用10、20、30、40μg/mL的榄香烯处理，每孔总体积为100μL。各个浓度均设6个复孔，另设空白对照孔和调零孔。在培养箱分别培养24、48、72 h后，各取出1块96孔板，每孔加入CCK-8溶液10μL，混匀后37 ℃培养箱继续孵育3 h，酶标仪450 nm波长测吸光度(A450)。生长抑制率=(对照孔A值-实验孔A值)/对照孔A值×100%。

    1.2.3 Annexin V/PI荧光标记法检测细胞凋亡：将1.0×105个/mL的细胞接种于6孔板上 ......