吴之浩

    (义乌市中心医院 普外一科， 浙江 金华 322000)

    低氧是实体瘤局部微环境的特征之一。低氧时，肿瘤细胞发生恶性生物学行为改变：糖酵解途径、增殖、侵袭和转移能力增强，对化疗药物产生耐药性，对放化疗不敏感等[1]。前期研究发现，低氧应激促进人HepG-2细胞黏附、侵袭和迁移[2]。本研究模拟肝癌低氧微环境，探讨低氧应激对人HepG-2细胞甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响。

    1 材料和方法

    1.1 细胞株和主要试剂 人肝癌细胞株HepG-2引自兰州军区总医院实验科(来源于美国国立肿瘤研究所)， 胎牛血清为杭州四季青生物工程公司产品，RT-PCR Kit 购于Takara公司，Trizol为Invitrogen公司产品。MMP-9、TIMP-1、VEGF ELISA试剂盒、AFP放射免疫试剂盒由上海生物制品研究所提供。

    1.2 体外细胞培养及实验分组 HepG-2细胞置灭活10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI1640培养液，于37 ℃、5% CO2培养箱中培养，每3～5天传代一次。低氧组HepG-2细胞置37 ℃、5% O2、5% CO2、90% N2三气培养箱中培养24 h。

    1.3 HepG-2细胞AFP、VEGF、TIMP-1、MMP-9 mRNA表达量的测定 Trizol一步法提取细胞总RNA，电泳见28 s、18 s条带，以2.5μg总RNA为模板，以Takara公司的Random premier为引物进行逆转录反应合成cDNA ......