饶品欢，石朝晖，李文姝，吕艳，陈向敏，朱珊丽，张丽芳

    (1.温州医学院 微生物学与免疫学教研室、分子病毒与免疫研究所，浙江 温州 325035；2.平顶山市疾病预防控制中心 检验科，河南 平顶山 467000)

    沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，Ct)是一类通过黏膜感染，严格胞内寄生的原核细胞型微生物，不仅是发展中国家感染性致盲的主要原因[1]，也是引起人类性传播疾病的一种重要病原体。Ct持续性感染可导致女性慢性盆腔炎、不孕和异位妊娠等严重并发症，同时Ct生殖道感染还能提高HIV和高危型HPV传播的概率[2-4]。

    抗生素对Ct生殖道感染具有很好的疗效，但不能改善已经发生的病变，同时由于无症状性衣原体感染普遍存在，给预防Ct的感染和并发症的发生带来很大困难。因此研制安全有效的疫苗是控制泌尿生殖道Ct感染的最好方法之一。Ct主要外膜蛋白(major outer membrane protein，MOMP)占Ct外膜蛋白的60%，是引起宿主免疫反应的主要靶抗原。抗原是诱导机体免疫反应的决定因素，而免疫剂量也影响免疫反应发生的强弱，由于表位是免疫反应的物质基础，我们前期工作构建了含T、B细胞表位的重组多表位Ct MOMP168[5]，本研究则探讨通过分子克隆技术构建成功的Ct多表位重组真核表达质粒(pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168)以DNA免疫方式诱导小鼠产生免疫应答的最适免疫剂量，为进一步研究pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168体内免疫学效应提供实验数据。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器 真核表达质粒pcDNA3.1(+)系Invitrogen公司产品；质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168和Ct E血清型由本实验室构建或保存；限制性内切酶HindIII和XhoI均购自上海晶美公司；无内毒素质粒抽提纯化试剂盒(Endofree Plasmid Maxi Kit)购自上海吉泰新绎生物技术有限公司(QIAGEN公司产品)；HRP-羊抗鼠IgG、HRP-羊抗鼠IgA均购自联科生物技术有限公司(KPL公司产品)；DL2 000TMDNA Marker和DL10 000TMDNA Marker均为TaKaRa公司产品；核酸蛋白分析仪(美国Beckman公司产品)；Elx 800型全自动酶标分析仪(美国BioTek公司产品)；其余试剂均为国产分析纯 ......