应俊，邵海刚，潘若望，李佩珍，张洪勤，曾兴业

    (1.温州医学院 生物学实验教学中心；2.温州医学院 检验医学院；3.中国人民解放军第118医院外科，浙江 温州 325000)

    桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis，HT)是一种器官特异性免疫疾病，属于自身免疫性甲状腺病(autoimmune thyroid disease，AITD)的一种，在自身免疫性甲状腺炎中位居榜首，约占7.3%～20.5%，男女患病比例为1:6～1:10[1]。温州地区位于我国东南沿海，甲状腺疾病是当地的常见病之一，其发病率明显高于内陆地区[2]。HT发病机制至今尚未彻底阐明，目前普遍认为，HT是环境和遗传共同作用的多基因遗传性疾病，其中遗传因素在HT的发病中起着十分重要的作用。为进一步明确病因，我们对HT患者进行了基因检测，观察温州地区汉族人群细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)外显子1第49位点和PTPN基因启动子-1123位点是否存在多态性以及与HT的相关性，探讨HT的遗传背景。

    1 对象和方法

    1.1 对象 为温州地区汉族人，均排除其他自身免疫性疾病史和严重的心、肝、肾疾病。①HT组：选自2006年9月-2011年3月就诊于温州医学院附属第二医院、解放军118医院内分泌科的HT患者150例，其中男60例，女90例，年龄40～53岁，平均(46.8±5.6)岁。HT的诊断依据为典型的临床表现结合实验室检查，详见森田陆标准[3]。②健康对照(CN)组：从我院体检中心按HT患者的年龄分布、性别构成随机选取健康体检者120例，其中男48例，女72例，年龄39～55岁，平均(45.7±6.4)岁。两组患者年龄、性别差异无统计学意义，具有可比性。

    1.2 方法 用5% Chelex-100快速提取法[4]提取模板DNA。利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术进行CTLA-4的外显子1+49位的多态性分析，上游引物：5’-GAAGGATGGTGCTTCACA GAT-3’，下游引物：5’-CTTTGCAGAAGACAGGGATGA-3’，上海捷瑞公司合成。反应条件：94 ℃ 5 min→94 ℃ 40 s，60 ℃ 40 s，72 ℃ 40 s，共35个循环→72 ℃ 7 min→4 ℃保存，扩增产物经6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察结果。

    利用单一等位基因特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SASP)技术进行PTPN基因启动子-1123SNP分析。PTPN22-1123 G > C F1：5’- CATTGAGAGGTTATG CAAGCTC-3’ ......