黄伟聪，王珏，，杨凯，旷文安，张浩，孙成超

    (1.温州医学院附属第一医院 心胸外科，浙江 温州 325000；2.北京阜外心血管病医院 再生医学实验室，北京 100037)

    骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells，BMSCs)具有取材方便、能进行体外培养、免疫原性低、可诱导分化成不同类型的成熟细胞等优点，目前已成为再生医学研究中的热点种子细胞，在心血管疾病及其他疾病的治疗中有着广泛的研究和应用前景[1-2]。但是，由于BMSCs在骨髓中原始数量少，需要长时间的体外扩增才能达到临床研究和应用的数量要求，因此增强BMSCs增殖的能力在临床干细胞研究和治疗应用中至关重要。

    miRNAs是近年来发现的一类内源性非编码单链RNA，长度在20～23个核苷酸，在种属间具有高度保守性，其通过抑制靶点mRNA的翻译或者促进降解而对基因的表达发挥负调控作用，参与调控生命细胞水平的一系列重要进程，包括细胞增殖、凋亡、分化及肿瘤形成等[3]。体外研究中发现miRNA-133b对心脏成纤维细胞、心肌祖细胞及平滑肌内皮细胞增殖具有调控作用[4-6]。本研究为了确定miRNA-133b对BMSCs的作用，在体外培养条件下，利用siPORT NeoFX转染rno-miRNA-133b模拟物(mimic)/抑制剂(inhibitor)至大鼠来源的BMSCs，上调/抑制细胞中miRNA-133b活性以探讨其对BMSCs增殖和凋亡的影响，并利用生物信息学方法预测其靶点基因，初步分析miRNA-133b影响BMSCs增殖的可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物 Spraque Dawley(SD)大鼠由温州医学院实验动物中心提供，体质量60 g，研究经温州医学院实验委员会批准。

    1.2 主要试剂 DMEM培养基、PBS、青链双抗、胰蛋白酶(北京四环生物有限公司)，胎牛血清FBS(美国Gibco公司)。MTS细胞增殖/毒性检测试剂盒(美国Promega公司)，Brdu细胞增殖比色法测定试剂盒(美国eBioscience公司)。TUNEL荧光法凋亡检测试剂盒(德国Roche公司)，rno-miR-133b mimic、inhibitor及其阴性对照(NC)(上海吉玛公司)。rnomiR-133b mimic序列为sense：5’-UUUGGUCCCCUUCAA CCAGCUA-3’，antisense：5’-GCUGGUUGAAGGGGACCAAA UU-3’；rno-miR-133b mimic NC序列为sense：5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’ ......