施翔翔， 高瞻， 伍新雷， 黄周青， 杨德业，2

    (1.温州医科大学附属第一医院 心内科，浙江 温州 325000；2.杭州师范大学附属医院 心内科，浙江 杭州 310015)

    原发性高血压即高血压病是老年人最常见的心血管疾病之一，近几年国内外学者的研究结果表明：原发性高血压是一种多基因疾病，可能存在多个“微效基因”的联合缺陷[1-2]。FXYD蛋白家族最近被证明是一个组织特异性调节Na+-K+-ATPase的小跨膜蛋白家族[3]。我们之前的研究表明在阻力血管(肠系膜动脉第二、第三级分支)和肾脏组织FXYD5基因表达水平在13周龄的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)组比Wistar大鼠(WKY)组下调14.8倍[4-5]，提示FXYD5可能在高血压发病机制中扮演重要角色。

    RNA干扰(RNA interference，RNAi)是近几年才被认识的自然界进化保守而普遍存在的一种现象[6]，目前广泛应用于哺乳动物细胞基因功能研究和基因表达调节。本实验选择RNAi技术特异性沉默其在血管平滑肌细胞内的表达，研究该高血压相关基因的沉默对血管平滑肌细胞所造成的一系列影响，包括增殖能力、迁移能力及Na+-K+-ATPase的活性改变，为探索高血压病新的致病基因及其发病机制提供参考和依据。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂 DMEM、0.05%胰酶/EDTA、胎牛血清购自Gibco公司；Trizol、Lipofectamine 2000转染试剂、DEPC水均购自Invitrogen公司；RT试剂盒(RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit)购自立陶宛Fermantas公司；Power SYBR?Green PCR试剂盒购自ABI公司；CCK-8试剂盒购自日本同仁化学研究所；超微量Na+-K+-ATPase测试盒购自南京建成生物工程研究所；Triton X 100溶液购自美国Amresco公司。

    1.2 细胞培养 大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(rat thoracic aorta smooth muscle cells A7r5，CRL-1444)，购自美国标准生物品收藏中心(ATCC)。接种于含有10% FBS的DMEM培养基中，置于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养，定期观察细胞生长情况，平均每3 d进行胰酶消化法传代。

    1.3 实验方法

    1.3.1 设计合成FXYD5特异的siRNA片段：siRNA片段由上海吉玛公司合成 ......