沈奇，张文文，陶雪娇，段萍，朱雪琼

    (温州医科大学附属第二医院 妇产科，浙江 温州 325027)

    ·论 著·

    14-3-3γ表达载体的构建及其对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

    沈奇，张文文，陶雪娇，段萍，朱雪琼

    (温州医科大学附属第二医院 妇产科，浙江 温州 325027)

    目的：构建一种稳定、高表达的14-3-3γ基因真核表达质粒载体，并探索其抗子宫肌瘤的作用。方法：提取子宫肌瘤细胞总RNA，反转录后通过RT-PCR扩增14-3-3γ，并将扩增的目的基因片段插入pCMVN-Flag真核表达质粒，构建重组质粒14-3-3γ-pCMV-N-Flag，重组体经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后，用脂质体转染技术导入子宫肌瘤细胞。应用Western Blot法检测14-3-3γ蛋白的表达，应用CCK-8检测细胞增殖变化，应用Annexin V-FITC/PI双染色法经流式细胞术检测细胞凋亡。结果：①构建的14-3-3 γ-pCMV-N-Flag真核表达载体经酶切后电泳和DNA测序，显示载体构建正确；②子宫肌瘤细胞转染重组体后的14-3-3γ表达明显高于转染前(P<0.05)；③子宫肌瘤细胞转染重组体后，细胞增殖抑制率为52.90%(P<0.05)；④转染重组体后肌瘤细胞的凋亡率明显高于转染前(P<0.05)。结论：本研究成功构建14-3-3γ-pCMV-N-Flag真核表达质粒载体，14-3-3γ在子宫肌瘤细胞内高表达后可抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡。

    子宫肌瘤；载体构建；增殖；凋亡

    14-3-3蛋白是一类高度保守的酸性蛋白家族，目前已发现14-3-3蛋白在哺乳动物中有七种亚型，分别为：β、γ、ε、η、ζ、σ和τ。该蛋白能够与细胞内200多种蛋白质结合，参与细胞信号传导、周期调控、凋亡、分化、恶性转化、迁移等多种细胞生命活动，在肿瘤的发生发展中发挥多方面的作用[1]。

    子宫肌瘤是女性生殖器官最常见的肿瘤，虽是良性肿瘤，却是导致生育年龄妇女子宫切除的首位原因[2]，严重危害了妇女的生殖健康。在我们的前期研究中，率先应用双向凝胶电泳和电喷雾串联质

    谱技术研究子宫肌瘤和周围正常肌层组织的差异蛋白质，并采用RT-PCR技术和免疫印迹(Western Blot)法进一步验证，发现14-3-3 γ在子宫肌瘤中的表达明显低于正常子宫肌层组织[3]，但14-3-3 γ在子宫肌瘤发生发展中的具体作用机制尚不明确。为此，本研究拟通过质粒转染技术，构建人子宫肌瘤14-3-3γ高表达载体 ......