3-甲基腺嘌呤对人耐药大肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响
孔板,抑制率,抑制剂,1材料和方法,2结果,3讨论
胡万乐,王玲琴,陈苏苹,陈荣(温州医科大学附属第二医院 中西医结合肛肠外科,浙江 温州 325027)
3-甲基腺嘌呤对人耐药大肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响
胡万乐,王玲琴,陈苏苹,陈荣
(温州医科大学附属第二医院 中西医结合肛肠外科,浙江 温州 325027)
目的:研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对耐5-氟尿嘧啶(5-Fu)结肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响,探讨自噬抑制剂在逆转结直肠癌耐药中的作用。方法:浓度递增筛选法诱导耐5-Fu(100 μg/L)的SW480细胞株,用10 μmol/L浓度的3-MA处理后,再用5-Fu(浓度200μg/L)作用24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,丹酰戊二胺(MDC)染色和电镜检测细胞自噬活性变化。结果:3-MA对耐药细胞自噬活性的抑制率达89.7%,增殖抑制率为9.6%,凋亡率为5.7%,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。经3-MA处理后,5-Fu对耐药SW480细胞增殖抑制率达71.6%±2.9%,凋亡率达36.6%±2.9%,而单用5-Fu细胞增殖抑制率仅为23.6%±2.9%,凋亡率仅为10.3% ±2.5%,3-MA预处理后5-Fu对耐药细胞的增殖抑制率及凋亡率均明显增强(P<0.05),自噬泡数量显著减少,自噬活性明显降低(P<0.05)。结论:3-MA单用时仅有较弱的抗肿瘤作用,与5-FU联用时耐药细胞的增殖及自噬活性被显著抑制,增强了SW480耐药细胞对5-Fu的敏感性,提高了化疗效果。
结直肠肿瘤;自噬;3-甲基腺嘌呤;氟尿嘧啶;耐药
自噬作为广泛存在于真核细胞中的一种生命现象,在许多重大疾病的发生发展中扮演重要角色。自噬活性对肿瘤的影响已在结肠癌[1]、神经胶质瘤[2]、肝癌[3]等多种肿瘤中得到证实。近年研究发现自噬与肿瘤耐药密切相关[4-5],我们前期研究也发现自噬活性的增强参与了SW480细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药的形成[6],但抑制自噬能否逆转肿瘤细胞的耐药,目前鲜见报道。因此,我们在前期诱导的耐5-Fu结肠癌SW480细胞的基础上,引入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA),探讨抑制自噬活性对耐药肿瘤细胞生存率的影响,为自噬抑制剂在临床中的应用提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 细胞及主要试剂人大肠癌SW480耐5-Fu细胞株为本课题组前期通过5-Fu浓度递增法诱导产生 ......
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