胡万乐，王玲琴，陈苏苹，陈荣

    (温州医科大学附属第二医院 中西医结合肛肠外科，浙江 温州 325027)

    3-甲基腺嘌呤对人耐药大肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响

    胡万乐，王玲琴，陈苏苹，陈荣

    (温州医科大学附属第二医院 中西医结合肛肠外科，浙江 温州 325027)

    目的：研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对耐5-氟尿嘧啶(5-Fu)结肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响，探讨自噬抑制剂在逆转结直肠癌耐药中的作用。方法：浓度递增筛选法诱导耐5-Fu(100 μg/L)的SW480细胞株，用10 μmol/L浓度的3-MA处理后，再用5-Fu(浓度200μg/L)作用24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率，丹酰戊二胺(MDC)染色和电镜检测细胞自噬活性变化。结果：3-MA对耐药细胞自噬活性的抑制率达89.7%，增殖抑制率为9.6%，凋亡率为5.7%，与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。经3-MA处理后，5-Fu对耐药SW480细胞增殖抑制率达71.6%±2.9%，凋亡率达36.6%±2.9%，而单用5-Fu细胞增殖抑制率仅为23.6%±2.9%，凋亡率仅为10.3% ±2.5%，3-MA预处理后5-Fu对耐药细胞的增殖抑制率及凋亡率均明显增强(P<0.05)，自噬泡数量显著减少，自噬活性明显降低(P<0.05)。结论：3-MA单用时仅有较弱的抗肿瘤作用，与5-FU联用时耐药细胞的增殖及自噬活性被显著抑制，增强了SW480耐药细胞对5-Fu的敏感性，提高了化疗效果。

    结直肠肿瘤；自噬；3-甲基腺嘌呤；氟尿嘧啶；耐药

    自噬作为广泛存在于真核细胞中的一种生命现象，在许多重大疾病的发生发展中扮演重要角色。自噬活性对肿瘤的影响已在结肠癌[1]、神经胶质瘤[2]、肝癌[3]等多种肿瘤中得到证实。近年研究发现自噬与肿瘤耐药密切相关[4-5]，我们前期研究也发现自噬活性的增强参与了SW480细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药的形成[6]，但抑制自噬能否逆转肿瘤细胞的耐药，目前鲜见报道。因此，我们在前期诱导的耐5-Fu结肠癌SW480细胞的基础上，引入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine，3-MA)，探讨抑制自噬活性对耐药肿瘤细胞生存率的影响，为自噬抑制剂在临床中的应用提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 细胞及主要试剂人大肠癌SW480耐5-Fu细胞株为本课题组前期通过5-Fu浓度递增法诱导产生 ......