姚秀萍，陈思希，任亚光，周怀彬，吕建新

    (温州医科大学 浙江省医学遗传学重点实验室，浙江 温州 325035)

    细胞在内部或外界环境的不利刺激下引起蛋白稳态失衡时会激活一系列的保护性反应，具体到细胞内的不同部位有内质网未折叠蛋白反应、细胞质未折叠蛋白反应、线粒体未折叠蛋白反应(mtochondrial unfolded protein response，UPRmt)[1-6]。当线粒体蛋白稳态受到影响时，细胞核基因编码的定位于线粒体的分子伴侣HSP-6、HSP-60等的表达会上调，以使发生错误折叠的蛋白质形成正确构象并促进新生蛋白质的正确折叠，这一过程叫作UPRmt[7-9]。转录因子ATFS-1介导UPRmt信号通路，ATFS-1含有线粒体及细胞核定位序列，在正常条件下，ATFS-1进入线粒体并被蛋白酶CLPP-1、LON-1等降解；在线粒体受到应激时，如线粒体亚基被RNAi敲低等，ATFS-1进入线粒体减少而进入细胞核增多，从而激活下游基因如分子伴侣HSP-6、HSP-60等表达，即激活UPRmt[10-11]。线粒体膜蛋白HAF-1被认为介导线粒体与细胞核之间的信号传递并参与UPRmt，然而最近发现clk-1的敲低通过HAF-1激活UPRmt，而nuo-6、cco-1等基因RNAi对UPRmt的激活则不依赖HAF-1[10，12-14]。

    线粒体功能紊乱与人类许多疾病的发生有关，然而在线虫及果蝇等低等生物中却延缓衰老[15-17]。我们此前发现，敲低线虫线粒体转铁蛋白MFN-1后显著延长寿命[18]。现就mfn-1RNAi是否激活UPRmt及其激活的信号通路进行研究，今后将进一步验证UPRmt的激活是否介导了mfn-1RNAi寿命延长。

    1 材料和方法

    1.1 材料 线虫N2、SJ4058、SJ4100、TJ375、SJ4005、RB867、VC3201，大肠杆菌HT115(DE3)由Caenorhabditis genetics center(CGC)提供；质粒L4440由本实验室保存；LA Taq酶、DNA marker购自宝生物有限公司；异丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、氨苄青霉素、盐酸四环素钠、琼脂、蛋白胨、酵母提取液、硫酸镁、氯化钙、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等试剂购自Sigma；其他材料为本实验室保存。

    1.2 SJ4058雄虫的制备 将L4期SJ4058线虫挑至铺有HT115菌膜的板上，每板6条，共5个板，置于31 ℃热激6 h，然后置于20 ℃培养。3～4 d后寻找F1代雄性线虫(尾巴有突起状) ......