童月红，周颖，吴丹丹，傅晓艳

    (1.金华市中心医院 妇产科，浙江 金华 321000；2.温州医科大学附属第一医院 生殖医学中心，浙江温州 325000；3.金华市职业技术学院 解剖学教研室，浙江 金华 321000)

    卵巢组织冷冻移植技术的发展为保存女性的生殖及内分泌功能提供了可能。但卵巢组织的来源极为有限，无法满足如卵巢早衰等患者的自体卵巢组织冷冻移植的需求。冻融人胎卵巢组织进行移植可成为解决这一问题的有效途径，但将其应用于临床尚需大量的实验研究。本研究以裸鼠异体移植作为实验模型，比较不同的外源性促性腺激素作用方式对冻融人胎卵巢组织异种移植后卵泡发育的影响，为其将来作为移植供体的可行性提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料 经温州医科大学伦理委员会批准收集引产的女性胚胎卵巢(由温州医科大学附属第一医院分娩室提供，并与家属签署知情同意书)6例，胎龄为28～35周。本实验选用雌性裸鼠(BACLB/CA/nu-nu，购自中科院上海实验动物中心)54只，6～8周龄，体质量17～23 g，平均(20±3.15)g，饲养于温州医科大学实验动物中心。实验动物按不同外源性促性腺激素给予方式(A、B、C)及不同时期(分别为10～14周、18～22周、26～30周)回收移植物分为9组，每组6只，共54只。

    1.2 主要试剂 Leibovitz-15(购自Sigma公司)，丙二醇(PROH)(购自Sigma公司)，孕马血清促性腺激素(PMSG)(购自宁波第二激素厂)，人绒毛膜促性腺激素(hCG)(购自丽珠集团)，Bolin固定液、增殖细胞核抗原(PCNA)试剂盒(由北京中杉金桥生物技术有限公司提供)。

    1.3 方法

    1.3.1 人胎卵巢组织的冻融：获取的卵巢组织室温下Leiboviz-15基础培养液中切成约2 mm×3 mm×3 mm小块，组织立即于Bolin液中固定为新鲜组。其余组织块置于含1.5 mL PROH冷冻保护液的冷冻管中，采用Oktay等[1]提出的慢速冷冻快速复温法操作，解冻后组织块于Bolin液中固定为冻融组，其余组织切成约1 mm3大小用于移植，为移植组。

    1.3.2 去势及移植手术：腹腔麻醉后，去除裸鼠双侧卵巢，暴露肾脏，分别于双侧肾被膜下各移入1块组织。冻融人胎卵巢组织异种移植后将实验动物随机分为3组(每组各18只)，A组：移植术后4周开始每只隔日PMSG 5 IU经腹腔注射至取材；B组：取材前14 d开始每只隔日经腹腔注射PMSG 5 IU，直至取材 ......