潘镏镏，郑飞云，诸海燕，章圣辉，胡燕

    (1.温州医科大学附属第二医院 妇科，浙江 温州 325027；2.温州医科大学附属第一医院 妇科，浙江温州 325015)

    ·论 著·

    鸦胆子素D对HPV16感染细胞株的作用及其可能机制

    潘镏镏1，郑飞云2，诸海燕2，章圣辉2，胡燕2

    (1.温州医科大学附属第二医院 妇科，浙江 温州 325027；2.温州医科大学附属第一医院 妇科，浙江温州 325015)

    目的：研究鸦胆子素D对高危型人类乳头瘤病毒(HPV)16感染细胞的增殖抑制作用、促凋亡作用及其可能机制。方法：以人宫颈鳞状上皮永生化细胞株(Ect1/E6E7)作为HPV16型感染的宫颈癌前病变的体外实验模型，用1、5、10、15、30 μ mol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h，用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定细胞增殖活性改变；以1、5、10 μ mol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h后，Cell cycle staining solution检测细胞生长周期变化，Hoechst 33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡情况，Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率。宫颈癌细胞株Caski含有完整的HPV16型E6、E7基因序列，以此作为阳性对照，通过实时荧光定量PCR技术检测两种细胞内HPV16 E6、E7基因mRNA的表达。结果：鸦胆子素D对Ect1/E6E7细胞具有明显的抑制体外增殖作用，MTT结果显示抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。经1、5、10 μ mol/L鸦胆子素D体外作用48 h后，细胞生长周期停滞于G1期。流式细胞仪检测显示，各实验组细胞经鸦胆子素D作用48 h后，细胞凋亡率分别为(6.25± 0.76)%、(20.21±1.32)%和(8.61±1.59)%，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Hochest33258细胞核染色法显示细胞出现凋亡形态学改变。Real-time PCR技术检测结果显示Ect1/E6E7中HPV16 E6、E7 mRNA表达水平无明显下降，与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。而Caski中HPV16 E6、E7 mRNA表达水平下降，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：鸦胆子素D能有效地抑制Ect1/E6E7细胞增殖，其机制可能是通过抑制HPV16 E6、E7 mRNA表达从而促进细胞凋亡。

    人宫颈永生化细胞；鸦胆子素D；增殖；人乳头瘤病毒16 ......